白介素2参与云芝糖肽镇痛作用的研究

作者：刘远嵘 顾振纶 印其章。

【摘要】 研究云芝糖肽（polysaccharopeptide,PSP）的镇痛作用并探讨其镇痛机制。［方法］60只SD大鼠，随机分为5组，即正常对照组、不同剂量PSP组和杜冷丁阳性对照组。PSP连续给药6d，用电刺激鼠尾嘶叫法测定痛阈，观察PSP对痛阈的影响。同时测定PSP对下丘脑内侧基底部（MBH）白介素2(IL2)和白介素2受体（IL2R）表达的影响。［结果］大鼠经PSP治疗后，与正常组比，其痛阈升高，且有明显的量效关系。PSP能增加大鼠MBH区域IL2免疫反应阳性细胞的数量，减少IL2R阳性颗粒的分布。［结论］PSP有中枢性镇痛作用,其镇痛作用靶点可能位于下丘脑内侧基底部。机制可能与PSP刺激T细胞分泌IL2，IL2进入脑内并与MBH中的IL2受体结合有关。

【关键词】 云芝糖肽;镇痛;白细胞介素2;下丘脑内侧基底部。

A total of 80 rats were divided randomly into high dose of psp,medium dose of psp, low doses of psp, positive control group, negative control group.After intragastric (ig) administration of different (high, medium and low)doses of PSP for 6 days,The tail stimulationvocalization test was used to observe the analgesic effect of PSP.The IL2 and IL2R expression in mediobasal hypothalamus (MBH) was studied immunohistochemically.［Results］ After intragastric (ig) administration of PSP for 6 days, the pain threshold was increased significantly and a doseeffect relationship was observed. After PSP administration the IL2 expression in MBH was increased, while the IL2R expression in MBH was decreased.［Conclusion］ PSP has a definite analgesic effect and its analgesic site is in the MBH.The analgesia might be produced by the binding with the IL2R in MBH by IL2 secreted by T cells after PSP was injected into the brain.

Key words: polysaccharopeptide；analgesia；interleukin2(IL2)；IL2 receptor；mediobasal hypothalamus(MBH)。

云芝糖肽（polysaccharopeptide,PSP）是从担子菌纲多孔菌科云芝属真菌云芝或培养的菌丝体中提取纯化的多糖，是一种良好的生物效应调节剂［1］。本实验拟围绕PSP影响脑内IL2和IL2受体表达和PSP镇痛的关系进行探讨。

1 材料和方法。

1.1 药物及试剂。

云芝糖肽胶囊，由上海新康制药厂生产。批号021101 ；多聚甲醛；太平洋化工（集团）公司溶剂厂；免疫组化染色超敏试剂盒，福建迈新公司；兔抗大鼠IL2抗体和兔抗大鼠IL2受体α链 抗体，武汉博士德。

1.2 实验仪器。

WQ9E痛阈测定仪，北京海淀电子仪器厂；A0820型石蜡切片机；OLYMPUS USPT BX41电子显微镜。

1.3 动物 　　清洁级SD 大鼠，体重（180～220）g，雌雄各半，由苏州大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号：XCYK(苏)20022008；动物使用许可证号SYXK（苏）2002～0037。

1.4 实验方法。

（1）痛阈测定：采用电刺激鼠尾法测定 ，以引起大鼠嘶叫反应的电流强度（mA）作为痛反应指标，每5min测1次，取3次均值作为基础痛阈。基础痛阈测定后，大鼠随机分为5组：PSP大、中、小剂量组分别采用PSP2g/kg 、 PSP1g/kg 、PSP0.5/kg灌胃6d，阳性对照组（杜冷丁2mg/100g）肌肉注射1d，正常对照组（生理盐水2mｌ/100g）灌胃6d。5组大鼠于第6天清晨给药完毕后，分别测给药30、60、90、120、150min后痛阈的变化。（2） IL2和IL2R免疫组化测定：各组大鼠测痛后，用4％的水合氯醛麻醉，打开胸腔，在左心室心尖处进针，右心剪一小口灌流PBS约15min，50～200ml，再用4％的甲醛（含1倍PBS）继续灌流200 ml，取出鼠脑，放入4％的甲醛中固定。24h后，取鼠脑中MBH部位（包括弓状核、腹内侧核、室周核、视交叉核前核、漏斗部）制石蜡片，脱蜡，水化后，用ABC法进行免疫组化测定，DAB显色。一抗为IL2抗体或IL2RαMcAb。DAB免疫反应阳性为棕色，分布于胞浆中。在显微镜下MBH区域弓状核部位计数阳性细胞数，每例连续计数5个高倍镜视野，并计算着色细胞阳性率。