清热祛湿益气法对Con A诱导急性肝损伤小鼠的超微病理研究

作者：刘超 黄霞，孙为，刘惠霞。

【摘要】 目的观察清热祛湿益气法(QSYF)对Con A诱导肝损伤小鼠肝组织超微结构的影响。方法Balb/c雄性小鼠随机分为空白对照组，模型对照组，QSYF 低、中、高剂量组，予双蒸水(空白对照组、模型对照组)或QSYF药剂(QSYF不同剂量组)，连续灌胃7 d，空白对照组注射等量无菌PBS溶液，其他组静脉注射Con A复制肝损伤模型，6 h后立即解剖肝脏，同部位取肝组织，进行电镜观察。结果模型对照组肝细胞出现许多细小脂滴, 内质网、线粒体数目明显减少，线粒体肿胀，嵴模糊。核表面发芽现象并异染色质电子密度增高。QSYF各组均无核表面发芽等现象，且随QSYF药液剂量增大上述病变明显减轻。结论QSYF对Con A诱导的肝损伤具有明显的拮抗作用。

【关键词】 清热祛湿益气法; 刀豆蛋白A; 肝损伤; 超微病理; 小鼠。

清热祛湿益气法是中医临床治疗肝病的有效治则，多年来治疗乙肝、甲肝等肝脏疾病疗效显著。肝病的发病机制与T细胞功能紊乱密切相关[1]，而刀豆蛋白A(Con A)可诱导小鼠发生T细胞依赖性急性肝损伤[2]，我们进行了清热祛湿益气法对该模型动物超微病理实验研究，以探讨清热祛湿益气法的作用机理。现报道如下。

1 材料。

1.1 试剂刀豆蛋白A(Con A )，美国Sigma公司产品，批号C2010。实验时用无菌PBS溶液配成2mg/ml的溶液备用;戊二醛，上海国云集团化学试剂有限公司生产，批号20040420。

1.2 受试药物清热祛湿益气法(简称QSYF)中药由虎杖、连翘、板蓝根、黄芪、西洋参、山药、五味子、甘草组成，经提取浓缩为药物浸膏液，每毫升含原生药2 g，河南省中医药研究院中药分析室提供，批号20060506。

1.3 动物与分组Balb/c雄性小鼠23～28 g,河南省实验动物中心提供，合格证号：SCXK(豫)2005—001。

2 方法。

动物随机分为5组。空白对照组和模型对照组分别给予双蒸水0.4ml/20g，QSYF低、中、高剂量组分别给予QSYF药液5，10，15 g/kg，各组连续灌胃7 d。第7天动物禁食14 h后，除空白对照组外，各组小鼠尾静脉注射ConA溶液 20 mg/kg，空白对照组小鼠注射等体积无菌PBS溶液，于注射后6 h处死小鼠，立即解剖肝脏，同部位剪取肝组织，做以下处理：将肝组织在蜡板上迅速切成0.5mm3的肝组织小块，放入预冷的4%戊二醛PBS溶液中固定，锇酸后固定，常规制作超薄切片，进行透射电子显微镜观察。

3 结果。

3.1 QSYF对肝细胞超微结构的影响空白对照组肝细胞形态正常，核呈卵圆形，细胞质内线粒体丰富，线粒体嵴排列整齐，含有丰富的粗面内质网，粗面内质网未见脱颗粒现象，胞质内未出现异常的形态结构。见图1(a，b)。模型组肝细胞形态多边形，肝细胞浆内出现许多细小脂滴;线粒体肿胀，数目明显减少，线粒体嵴变短或模糊消失，嵴内腔增大呈泡状;内质网也明显减少并呈泡状结构。细胞核可见出芽状态，异染色质电子密度增高，核仁电子密度也增高。见图1(c，d)。SYF低、中、高剂量组与模型组比较，随剂量增大肝细胞质内脂滴减少，线粒体、内质网增多，中、高剂量组肝细胞内线粒体嵴大部分排列整齐，细胞核异染色质明显减少，而常染色质明显增多;高剂量肝细胞内质网明显增多并呈多层状排列。各剂量组均未有细胞核出芽现象。见图1(e,f,g,h,i,j)。