呋塞米注射液中细菌内毒素检查方法的研究
【摘要】 目的 寻求使用鲎试剂检测呋塞米注射液中细菌内毒素的方法。方法 按照《中国药典》2005年版二部收载的细菌内毒素检查方法进行试验。结果 当样品作25倍稀释时，呋塞米注射液对鲎试剂的凝集反应未见干扰作用，测试结果均符合规定。结论 可以用细菌内毒素检查法来控制呋塞米注射液的质量。
呋塞米注射液（furosemide injection, FI）为强效利尿药，临床上主要用于水肿性疾病，包括充血性心力衰竭、肝硬化、肾脏疾病（肾炎和肾病及各种原因所致的急、慢性肾功能衰竭，尤其是应用其他利尿药效果不佳时，应用本类药物仍可有效），另可用于高血压、预防急性肾功能衰竭、高钾血症及高钙血症等。成人每次最大用量为4mg/（kg·h） 【1】。FI一般为静脉给药，而现行标准【2】未对其细菌内毒素采取质量控制措施，故本文初步建立了FI的细菌内毒素检查法，用于FI中细菌内毒素的控制。现总结如下。
1 实验材料。
呋塞米注射液规格2ml:20mg，批号0701221、0704111、0704121（市售品、为同一公司产品，经全检均符合规定）。细菌内毒素工作标准品，批号2007—5，效价100EU/支（中国药品生物制品检定所）。鲎试剂（TAL）批号0705250、灵敏度（λ）为0.25EU/ml（湛江安度斯生物有限公司,经灵敏度复核符合规定）；细菌内毒素检查用水（BET水）批号0612280，内毒素含量≤0.015EU/ml（湛江安度斯生物有限公司）。
2 方法与结果。
2.1 FI的细菌内毒素限值的计算【2】 根据公式L=K/M，M为静脉给药，最大剂量为4mg/（kg·h），K为5EU/（kg·h），因此FI的细菌内毒素限值L=1.25EU/mg。
2.2 FI最大有效稀释倍数（MVD）的确定【2】 FI的限值L=1.25EU/mg，由于样品的规格为2ml:20mg，因此FI的限值也即为L=12.5EU/ml，所以对应于市售常用灵敏度（λ）0.5～0.03EU/ml的TAL，按照公式MVD=cL/λ计算，供试品可选择的稀释倍数分别25、50、100、200、400倍。
2.3 干扰试验预试验 为了解供试品本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在的干扰情况，选择一批经全检合格的FI用BET水做25、50、100、200、400倍稀释。用此系列溶液作为溶剂溶解并稀释内毒素，使每个稀释度中内毒。