芎汤大孔树脂柱洗脱物对心肌缺血小鼠红细胞膜流动性的研究
作者：容蓉，杨勇，陈明强，邱丽丽，孙秀梅，张丹。
【摘要】 摘要：目的研究芎汤不同提取部位对小鼠急性心肌缺血的保护作用。方法分别制备芎汤乙醇提取液过大孔吸附树脂柱的20%，40%，60%，95%乙醇洗脱部位（EE20，EE40，EE60，EE95部位）。用腹腔注射异丙肾上腺素造成小鼠急性心肌缺血模型，观察不同洗脱部位对心电图、红细胞膜流动性的影响。 结果EE20，EE40，EE60部位对异丙肾上腺素引起的心肌损伤小鼠，可拮抗S—T段异常变化；EE20，EE40部位可显著性降低荧光探剂DPH标记的小鼠红细胞膜荧光偏振度，增强红细胞膜流动性。 结论芎汤EE20和EE40部位对实验性心肌缺血有明显的保护作用。
Abstract：ObjectiveTo explore the protective effect on acute experimental ischemic myocardium in mice by different elutes from macroporous resin for separation of Xiongqiong decoction. MethodsThe ethanol extract from Xiongqiong Decoction was obtained firstly. Then 20, 40, 60 and 95 percent ethanol elute (EE20, EE40, EE60 and EE95) were prepared by using the column stuffed with absorbent macroporous resin. Acute myocardial ischemic model induced by intraperitoneal administration of isoproteronol (ISO) in mice was adopted to observe the effects of the different elutes on the electrocardiogram and the membrane fluidity of erythrocytes. ResultsCompared with the model group, EE40 and EE60 could reduce the elevation of ST segment induced by ISO. EE20 and EE40 could decrease the fluorescence polarization which demonstrated the effect of increasing the cell membrane fluidity in the inactive state. ConclusionThe extracts of EE20 and EE40 have protective effect against ISO—induced acute myocardial ischemia in mice.
Key words： Xiongqiong decoction; Acute myocardial ischemia; Eelectrocardiogram; Membrane fluidity of akaryocyte 中药复方芎汤出自《千金方》，由当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels.和川芎Ligusticum chuanxiong Hort.等份组成，具有养荣活血的功效。现代药理研究证明，川芎、当归可以抗血栓形成，抑制血管平滑肌细胞增生，显著增加脑血液流动性，保护、减轻脑缺血造成的脑部病理损害，缓解由此引起的行为障碍［1～3］。本课题采用大孔吸附树脂柱对芎汤乙醇提取物分离纯化，制备不同浓度乙醇洗脱部位，考察其对急性心肌缺血小鼠心电图及红细胞膜流动性的影响，评价芎汤不同提取部位在活血方面的活性。
1 仪器与试药。
1.1 动物昆明种小鼠，SPF级，体质量18～22 g，雌雄各半，购于山东中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK（鲁）20070004。
1.2 仪器BL—420E+生物机能实验系统（成都泰盟），RF—540型荧光分光光度计（日本岛津公司）；RE—52C型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1.3 药材和试剂当归、川芎药材（购自济南市建联药店）；大孔吸附树脂HP20（日本三菱化学公司）；盐酸异丙肾上腺素（Isoproterenol, ISO）注射液（上海禾丰制药有限公司，批号6E20003，规格0.5 mg·ml—1）；荧光探剂DPH(1，6—二苯基—1，3，5—己三烯；Sigma公司，批号109F3518)；PBS磷酸盐缓冲溶液（北京中杉金桥生物技术有限公司，批号ZLI—9062）；生理盐水（山东长富洁晶药业有限公司）；戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20021216）；肝素钠注射液（江苏万邦生化医药股份有限公司，批号0512104）。
2 方法与结果。
2.1 芎汤大孔树脂柱洗脱物灌胃溶液的制备当归、川芎药材粉碎，过20目筛，分别取500g，混合，加12倍量70%的乙醇回流提取3次，1.5h/次，合并提取液，回收乙醇，浓缩至2 000 ml。以1∶3的比例（药材质量与树脂体积比）过HP20大孔树脂柱，分别用10倍量的水、20%，40%，60%和95%的乙醇洗脱，收集不同浓度的醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩至每毫升溶液相当于1 g当归、川芎的生药量。分别取各醇洗脱部位提取液200 ml，水浴60℃浓缩至近干，加少许吐温80使成混悬液，转移至50ml量瓶中，加水定容至刻度（分别简称EE20，EE40，EE60和EE95）。
2.2 盐酸异丙肾上腺素剂量的选择取36只小鼠，随机分为4组，每组9只，分别为空白对照组及腹腔注射异丙肾上腺素4 ml·kg—1组，6 ml·kg—1组和8 ml·kg—1组。给小鼠称重，0.05%戊巴比妥钠（8 ml·kg—1）麻醉，用BL—420E+生物机能实验系统分别记录空白对照组和腹腔注射盐酸异丙肾上腺素不同剂量组的小鼠S—T段在30 s、1，5，10，20 min的偏移值，从预试结果来看，注射盐酸异丙肾上腺素6 ml·kg—1的剂量在5，10，20 min时间点有显著性差异，注射8 ml·kg—1的剂量虽然也有显著性差异，但容易导致小鼠死亡，故选择盐酸异丙肾上腺素的剂量为小鼠体重注射6 ml/kg，连续注射2 d，监测的时间点为5，10，20 min。
2.3.1 分组及给药实验前在麻醉下记录小鼠正常心电图1次，对心电图异常者予以剔除。用于实验的小鼠随机分为6组，每组10只，各组分别为空白组，模型对照组，EE20组，EE40组，EE60组，EE95组。空白组和模型对照组均给蒸馏水，剩余组均给予药30 ml·kg —1，连续给药9 d。