中华补血草根提取物抗四氯化碳急性肝损伤的实验研究
作者：汤新慧 高静 陈瑾 徐力致。
【摘要】 目的 研究 中华补血草根提取物（the Limonium sinense Ktze root extract, LSE）对小鼠急性肝损伤的防护作用及药理机制。 方法 建立小鼠四氯化碳（CCl4）肝损伤模型，检测LSE对血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的 影响 ；观察肝细胞超微结构的变化；测定肝线粒体膜电位以及线粒体对高钙诱发肿胀的敏感性的变化。结果一定剂量（100～400 mg/kg）LSE能有效抑制CCl4引起的小鼠血清AST及ALT活性的显著上升；明显减轻肝损伤引起的小鼠肝脏线粒体形态结构的破坏；抑制线粒体膜电位的降低以及线粒体对外加高钙诱发肿胀敏感性的下降。结论 LSE对CCl4诱导的急性肝损伤具显著的防护作用，其机理可能与保护肝脏线粒体有关。 毕业论文。
【关键词】 中华补血草 四氯化碳 肝损伤 线粒体 论文代写。
Abstract:ObjectiveTo study the hepatoprotective effect of Limonium sinense (Girard) Ktze root extract (LSE) and the possible mechanisms underlying its protection on acute liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4). Methods CCl4—induced liver injury model was used to evaluate the effect of LSE on the activities of serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) in mice. Ultrastructure of liver was observed and liver mitochondrial membrane potential and mitochondrial swelling were measured following CCl4 injection without or with LSE. ResultsWith oral pretreatment of 100 mg/kg, 200 mg/kg or 400 mg/kg LSE, the increase in serum AST and ALT activities induced by CCl4 were obviously reversed and significant morphological changes in liver mitochondria were remarkably lessened. In addition, the decrease in mitochondrial membrane potential and sensitivity of mitochondrial swelling to the exotic Ca2+ stimulation induced by CCl4 were also prevented by LSE. Conclusion LSE has hepatoprotective activity and the mechanisms underlying its protective effect may be related to its protection on liver mitochondria. 论文网。
Key words:Limonium sinense (Girard) Ktze; Carbon tetrachloride; Liver damage; Mitochondria 中华补血草Limonium sinense (Girard) Kuntz 系白丹花科补血草属多年生泌盐草本植物，喜生于沿海盐渍化的低洼湿地上，广泛分布于我国东北、华北及陕、甘、宁和苏北等地区。除具有较高观赏价值、环境保护等作用外，具有一定药用价值。成分 分析 表明，该植物化学成分十分丰富，含有多糖、鞣质、萜类、黄酮类，以及氨基酸、矿物质等［1～2］。据记载，该植物具有补血、止血、散淤、调经、益脾、健胃等多种功效。然而，关于该植物的药理研究和临床 应用 相对滞后， 目前 中华补血草药理作用的研究主要集中在其抗菌止血方面，临床上主要用于 治疗 功能性子宫出血症［3］。最新的研究初步发现，中华补血草提取物能抑制CCl4及D—GalN肝损伤动物血清转氨酶活性的升高［4］，提示该植物可能具有对抗肝损伤作用。然而中华补血草的护肝作用还缺乏全面、深入的研究，其药理机制有待于进一步考察。 本研究拟采用CCl4小鼠急性肝损伤模型，运用肝细胞超微结构观察，酶活力测定以及线粒体膜电位测定、肿胀敏感性测定等方法，研究中华补血草根提取物（LSE）对小鼠急性肝损伤的防护作用并探讨其药理机制。 代写论文。
1 材料和方法 论文网。
1.1 中华补血草根提取物（LSE）的制备中华补血草采集于江苏盐城滩涂，由江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室于延球副教授鉴定。取中华补血草干燥全根100 g，粉碎，用蒸馏水提取1～3次，合并提取液，浓缩、干燥，即得棕色干粉32.9 g（得率32.9 %）。 论文网。
1.2 仪器与试剂7520分光光度计，上海分析仪器厂； Biofuge Primo R 冷冻离心机，Kendro 公司；Hitachi 7600—020全自动生化分析仪、Hitachi 850型荧光分光光度计，日立公司； Flexi—DryTM冷冻干燥仪，Stone Ridge公司；JEM100CX透射 电子 显微镜，日本电子公司。 罗丹明（Rh123），甘露醇、蔗糖、EDTA、琥珀酸、鱼藤酮，购自Sigma公司；Tris—HCl，Hepes，购自Promega公司。
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1.3 动物 ICR小鼠，雄性，体重18～22 g，购自南京医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK（苏）2002—0031。 论文代写。
1.4.1 动物分组与给药方法 小鼠分5组：正常组、CCl4损伤组、100，200，400 mg/kg LSE组。正常组和损伤组小鼠以0.2 ml/10 g体重生理盐水连续灌胃5 d，LSE各剂量组则分别以不同浓度LSE同样方式灌胃；第6天正常组小鼠按10 ml/kg腹腔注射橄榄油，其余组小鼠腹腔注射0.15% CCl4 (溶于橄榄油中，10 ml/kg)。18 h后，取血，分离血清，待测血清ALT，AST活力。处死小鼠后，取部分肝组织固定，待制备肝组织电镜切片，其余肝组织匀浆，制备肝脏线粒体。 代写论文。
1.4.2 生化检测 分离得到的各组小鼠血清，全自动生化分析仪测定血清ALT及AST活性。 论文代写。
1.4.3 形态学观察 所取各组小鼠肝组织，4%戊二醛溶液预固定，1%四氧化锇再固定，制备肝组织电镜切片，透射电子显微镜观察肝细胞超微结构。 论文代写。
1.4.4 线粒体的制备以及膜电位和肿胀度的测定 据Apprille法制备肝脏线粒体，考马斯亮蓝法测定蛋白浓度［5］。 按照Emaus法，使用荧光染料罗丹明（Rh123）测定线粒体的膜电位值(△Ψm)。测定时各处理组小鼠线粒体按0.5 mg/ml重悬于测定缓冲液中，在25℃条件下分别与0.3 mmol/L Rh123共孵3 min后，荧光分光光度计测定各组线粒体悬液的荧光强度（激发波长505 nm，发射波长534 nm），并 计算 膜电位的值。计算公式为：△Ψm=—59 log ［Rh123］in/［Rh123］out［6，7］。 线粒体肿胀程度根据线粒体悬液在波长为540 nm 处的吸光值测定。各组小鼠肝脏线粒体按1.0 mg/ml重悬于测定缓冲液中，于30℃条件下，测定各组线粒体悬液加入不同浓度氯化钙后5 min时吸光度的减少值，以此吸光度的减少值作为衡量线粒体肿胀程度的指标，比较各组线粒体诱发相同肿胀程度所需Ca2+浓度，诱发同等程度的肿胀所需的Ca2+浓度越高，表明该线粒体敏感性越低，说明损伤越严重［8，9］。 论文网。
1.5 统计方法 进行单因素方差分析（one way analysis of variance，one way ANOVA），各处理组的组间差异采用SNK—q（Student Newman Keuls—q）检验进行比较。显著性水平取α=0.05。
2 结果。
2.1 LSE对小鼠血清酶活力的影响由表1可看出，CCl4损伤小鼠的sAST及sALT活性显著升高（P0.01），而预先以不同剂量LSE灌胃给药的小鼠sAST及sALT活性均显著低于损伤组（P0.01），其中200，400 mg/kg LSE组小鼠sAST及sALT活性已恢复至正常，表明LSE对CCl4诱发的急性肝损伤有明显对抗作用。 论文代写。