超声波提取马鞭草中黄酮类化合物的工艺研究

作者：卞杰松，邓斌，王存嫦，章爱华，刘志伟。

【摘要】 　　目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草黄酮类化合物的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类化合物，对所提取的黄酮类化合物进行验证，并用紫外分光光度法测定其含量。结果测得马鞭草样品中黄酮类化合物的总含量为8.36 mg/g，回收率为99.56%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马鞭草中黄酮类化合物的有效途径。

【关键词】 超声波提取 马鞭草 黄酮类化合物。

Abstract：ObjectiveTo study the methods of extraction and identification of flavonoids from verbena officinalis L. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Verbena officinalis L. with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine and identify the flavonoids from Verbena officinalis L. Hunan.ResultsBy this method the contents of the flavonoids from Verbena officinalis L. was 8.36mg/g and the rate recovery was 99.56 %.ConclusionThis method is a pure physical process, and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavonoids from Verbena officinalis L.

Key words：Ultrasonic wave treatment; Verbena officinalis L.; Flavonoids 　　马鞭草Verbena officinalis L.又叫铁马鞭、自马鞭、疟马鞭，皆以穗类鞭鞘而得名。为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物马鞭草的全草或根。常生于河岸、草地、荒地、路边、田边及草坡等处，全国各地均有分布［1］。体内富含糖、淀粉、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质、黄酮、类胡萝卜素等许多活性成分［2］。药用部分为其全草或带根全草，作为一种传统的中草药，具有清热解毒、截疟杀虫、治痢、利水消肿、通经散瘀等功效，被广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等病症［3］。现代研究还发现马鞭草具有抗癌［4］、抗早孕［5］以及免疫调节作用［6］。 　　有文献报道马鞭草中黄酮类化合物的提取方法采用乙醇提取［2］， 但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［7～9］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［10］。超声技术应用于提取马鞭草中黄酮类化合物的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取马鞭草黄酮类化合物及鉴别。

1 材料。

1.1 仪器。

UV—752紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AL104 电子天平（Mettler—Toledo仪器公司）；KQ—500DE型医用超声波清洗机（昆山超声仪器有限公司）；F120型粉碎机（北京中仪金叶科技有限公司）；pH213型酸度计（上海雷磁仪器有限公司）；SHZ—D(Ⅲ)循环水式真空泵（郑州市亚荣仪器有限公司）。

1.2 试剂。

95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、三氯化铝、镁粉、正丁醇、氨水、盐酸、冰醋酸、乙酸镁、醋酸乙酯(均为AR)；芦丁标样(含量≥98%)由广东药学院药物化学研究室提供；马鞭草样品采于湖南省吉首大学校园内，并经湖南省药材公司李树胜执业药师鉴定为Verbena officinalis L.全草。

2 方法。

2.1 黄酮类化合物成分提取。

取新鲜马鞭草，洗净，晾干，粉碎。精密称取马鞭草粉末10.0 g，加100 ml 95%乙醇，超声波提取2 h，抽滤。滤渣再加100 ml 95%乙醇，超声波提取2 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～8 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，得待测样品溶液。

2.2 测定方法依据。

以芦丁为对照品测定马鞭草中黄酮类化合物的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

3 结果。

3.1 定量实验—黄酮类化合物的含量测定。

3.1.1 波长的选择。

取样品溶液适量，在0.5 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在400～700 nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于502 nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

3.1.2 标准曲线的绘制。

分别精密吸取芦丁对照液 (0.10mg/ml) 0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.50 ml，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0.50 ml，摇匀，静置5 min；再加4%氢氧化钠溶液5.00 ml，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以试剂作空白，于502 nm处测吸光度。结果见表1。根据表1得回归方程：A=—1.233 6×10—2+15.011C，r=0.999 8。表1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度值（略）。

3.1.3 提取物含量的测定。

精密吸取样品液0.5 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备操作测定吸光度A=0.615，根据回归方程：A=—1.233 6×10—2+15.011C，计算样品中黄酮类化合物的含量为8.36 mg/g。