膀胱癌中乙酰肝素酶的表达和临床意义
作者：赖潭，涂响安，吕自力，郑克立 丘少鹏，邓春华。
【摘要】 目的 探讨国人膀胱癌乙酰肝素酶的表达水平及其与膀胱癌发生、发展、转移和复发的关系。方法 应用免疫组化EnVision二步法研究58例膀胱癌患者中乙酰肝素酶蛋白的表达水平，10例正常膀胱黏膜为对照组。结果 乙酰肝素酶在膀胱癌中阳性表达22例(37.9%)，其表达率与肿瘤的病理分级、临床分期、复发和淋巴结转移有相关性(P0.05)。结论 乙酰肝素酶蛋白的异常表达可作为膀胱癌患者发生和发展的预后参数。
Expression and clinical significance of heparanase in Chinese with bladder carcinoma。
ABSTRACT: Objective To study the expression of heparanase in Chinese with bladder carcinoma and the relationship with its development, progression, metastasis and recrudesence. Methods Immunohistochemical technique was used to detect the expression of heparanase in 58 cases of bladder carcinoma. Results The positive protein expression of heparanase was 37.9% (22/58). The heperanase protein expression was correlated with the pathological type, clinical stage, recrudesence and lymph node metastasis (P0.05). Conclusion Heparanase protein overexpression might serve as a marker for the prognosis of Chinese bladder carcinoma.
KEY WORDS: bladder neoplasm; heparanase; immunohistochemical technique 细胞外基质和基底膜是肿瘤细胞侵袭及转移的屏障。糖氨聚糖是此屏障的主要成分之一，它的主要成分为硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycan, HSPG)。乙酰肝素酶(heparanase, Hpa)正是一种裂解糖氨聚糖中HS链的内切糖苷酶,在细胞侵袭中起着极其重要的作用。最近,随着Hpa基因得以克隆，相继获得一些有意义的实验结果，Hpa在侵袭性细胞穿越血管壁,实现浸润、扩散、转移过程中的关键作用受到广泛关注[1]。我们应用免疫组化EnVision二步法研究58例膀胱癌患者和10例正常膀胱黏膜乙酰肝素酶蛋白的表达水平，探讨膀胱癌中乙酰肝素酶的表达水平及其与膀胱癌发生、发展、转移和复发的关系。
1 资料与方法。
1.1 临床资料 收集中山大学第一附属医院泌尿外科1998—2003年手术切除膀胱癌标本58例,男性47例，女性11例。年龄21—81岁，平均58.6岁。WHO病理分级：G1 17例，G2 25例，G3 16例。UICC临床分期：T1 32例，T2 14例，T3 12例。复发20例，未复发38例。淋巴结转移阳性15例，阴性43例。10例正常膀胱组织作为对照。
1.2 方法。
1.2.1 试剂 鼠抗人乙酰化肝素酶单克隆抗体购自武汉博士德公司，EnVision二抗为DAKO公司产品，二氨基联苯胺(DAB)试剂盒购自福州迈新公司。全部标本均用10%(体积分数)中性甲醛固定，常规组织脱水、石蜡包埋，4μm厚组织切片，并进行HE染色，用于组织定位。
1.2.2 免疫组织化学染色 采用免疫组织化学染色EnVision二步法，实验步骤按试剂盒说明进行。乙酰肝素酶一抗工作浓度为1∶50，采用微波煮沸15min修复抗原，抗原修复液为0.01mol/L柠檬酸缓冲液(pH 6.0)。一抗4℃孵育过夜，PBS洗3次，EnVision二抗室温孵育40min，PBS洗3次后DAB显色3—5min，自来水终止显色，充分水洗后苏木精复染，常规脱水、透明、中性树胶封片。以已知阳性切片做阳性对照，阴性对照以PBS替代第一抗体。
1.2.3 结果判断 乙酰肝素酶阳性信号为细胞浆内呈现棕黄色颗粒，阳性细胞数10%为(—)；阳性细胞数10%—50%为(+)；阳性细胞数50%为()。
1.2.4 统计学分析 采用SPSS 13.0统计分析软件，χ2检验，以P0.05为有统计学意义。