甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

【摘要】 目的： 观察甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响. 方法： 实验组小鼠未成熟卵用7.25, 14.5，29 mg/L MXC不同浓度培养液培养；对照组小鼠未成熟卵直接用合成人输卵管培养液培养，两组培养时间均为24 h. 观察各组生发卵泡破裂(GVBD)和第一极体(PB1) 的形成, 出现PB1的卵母细胞视为核成熟. 结果： 培养24 h时，卵母细胞GVBD发生率7.25 mg/L MXC组为80.4%，14.5 mg/L MXC组为78.8%，29 mg/L MXC组为78.4%，与对照组的86%相比较并没有明显改变. 培养过程中不同浓度MXC试验组GVBD发生较同期对照组相比较也没有明显延迟. 但在培养液培养24 h时PB1的排出率7.25 mg/L MXC组为52.8%，14.5 mg/L MXC组为44.4%，29 mg/L MXC组为22%，明显低于对照组的71.2%，差异具有统计学意义(P0.05). 结论： MXC对体外培养的小鼠卵母细胞GVBD发生没有影响，但能抑制其卵母细胞的核成熟.

【关键词】 甲氧氯； 卵母细胞； 体外研究; 细胞培养技术。

【Abstract】 AIM: To investigate the effect of Methoxychlor (MXC) on in vitro maturation of mouse oocytes. METHODS： The oocytes in experimental groups were cultured in hunan tubal fluid(HTF) medium supplemented with 7.25，14.5，29 mg/L MXC and the oocytes in the unexposed control group were cultured in HTF medium for 24 h. Germinal vesicle breakdown (GVBD) and the first polar body (PB1) extrusion were observed in all groups. RESULTS: After 24 h of culture, the incidence of GVBD in experimental group(7.25 mg/L, 14.5 mg/L and 29 mg/L MXC) was 80.4%, 78.8% and 78.4% respectively, which was on obvious varience compared to the unexposed control. the process of GVBD occured without any significant delay. The first polar body extrusion of mouse oocytes after 24 h of incubation in the presence of MXC (7.25 mg/L: 52.8%; 14.5 mg/L:44.4%;29 mg/L:22%) was significantly lower than than in the unexposed comtrol group (71.2%). CONCLUSION: MXC could decrease the rate of normal nuclear maturation of mouse oocytes in vitro but exert little impact on the GVBD was seen.

【Keywords】 methoxychlor；oocytes；in vitro; cell culture techniques。

0引言　　甲氧滴滴涕(methoxychlor, MXC)是一种替代滴滴涕的有机氯杀虫剂，因其杀虫效果明显，生物毒性相对较低，在许多国家得到广泛应用. 常飞等 ［1—2］通过大鼠染毒实验发现雌性生殖系统对MXC非常敏感，MXC可导致早期流产、出生呼吸窘迫、生长发育迟缓和青春期性发育异常；可干扰孕小鼠的生殖功能, 导致生殖和胎仔发育毒性［3］；能改变小鼠的受孕和妊娠的维持［4］等. 而目前有关MXC对体外卵母细胞成熟和受精及胚胎发育的影响的报道却很少. 我们采用MXC体外培养小鼠未成熟卵母细胞，观察MXC对体外成熟时生发泡破裂(germinal vesicle breakdown，GVBD)和第一极体(the first polar body, PB1)形成的影响，为进一步研究MXC对小鼠卵母细胞发育能力的影响提供依据.

1材料和方法。

1.1材料。

未成熟卵母细胞取自8~12周龄雌性昆明白小鼠，体质量20~25 g (由第四军医大学实验动物中心提供)；MXC(美国SIGMA公司)； 孕马血清促性腺激素(PMSG，杭州第二激素制品厂)；合成人输卵管培养液(HTF，第四军医大学西京医院妇产科实验室提供)；二甲基亚砜(DMSO，美国Amresco公司).

1.2方法。

1.2.1卵母细胞培养液的配制将MXC完全溶解于DMSO，—70℃保存备用. 临用前用HTF将其分别稀释成7.25，14.5，29 mg/L MXC培养液, 配好后预平衡2 h.

1.2.2卵母细胞的获取在小鼠动情前期注射PMSG 510 IU，44~47 h后脱颈椎处死，取其卵巢置于输卵管液中，在解剖显微镜下用1 mL注射器针头刺破半透明状的卵泡，轻轻挤压使卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complex, COC)溢出，并选择外围至少包绕两层卵丘细胞的COC分为实验组和对照组. 卵母细胞在倒置显微镜下观察，以见到生殖泡者即为未成熟（germinal vesicle, GV期）卵母细胞.

1.2.3体外成熟培养所得COC用预平衡过的HTF培养液洗涤3次后移入培养液微滴中，实验组分别用含7.25，14.5，29 mg/L MXC的HTF培养液，对照组直接用HTF培养液培养于50 mL/L CO2 37℃培养箱中培养，总培养时间为24 h. 培养过程中在倒置显微镜下每隔1~2 h观察GVBD的发生率，培养24 h时观察PB1的形成情况. 若不能清楚观察到COC，可以采用巴氏吸管轻轻吹打脱去外层颗粒细胞. GVBD的发生表示减数分裂恢复，PB1的形成表示卵母细胞的核成熟.

统计学处理：采用SPSS 11.0软件进行χ2检验，P0.05为差异具有统计学意义.