益气补肺方对急性肺损伤大鼠ET—1和MIF水平的影响
作者：杨勇 傅晓青 董礼文 王军 程根苗。
【摘要】 目的 探讨益气补肺方对油酸性急性肺损伤大鼠的ET—1和MIF水平及肺组织学的影响及保护机制。 方法 将动物随机分为五组：中药组、西药组、中+西药组、模型组、正常组。用油酸诱发急性肺损伤，观察造模后大鼠肺系数、肺组织匀浆ET—1和MIF水平、肺组织学改变。 结果 与油酸组比较，中药组与中+西药组ET—1和MIF水平明显降低（P0.05），其中3组用药组间ET—1水平差异具有显著性（P0.05）。 结论 益气补肺方对油酸诱发的大鼠急性肺损伤有一定的保护作用，抑制ET—1和MIF生成是其作用机制之一。
【关键词】 益气补肺方 急性肺损伤 ET—1 MIF 肺组织学。
【Abstract】 Objective To study effects and mechanism of "Yi Qi Bu Fei Formula(YBF)" on ET—1 and MIF levels and lung histology in acute rats lung injury(ALI) induced by oleic acid . Methods The rats were randomly divided into five groups: YBF,dexamethasone(DXM), YBF+DXM, positive control, negative control. The model was set up by intravenous injection of oleic acid. The lung ratio, ET—1 and MIF levels in lung tissue, lung histologic examinations were conducted after oleic acid injection. Results Compared to those in positive control group, ET—1 and MIF levels were significantly reduced in YBF and YBF+DXM groups（P0.05）, there was a significant difference among the 3 treating groups in ET—1 level . Conclusions YBF protects the lung from acute rats lung injury induced by oleic acid by inhibiting ET—1 and MIF.
【Key Words】 Yi Qi Bu Fei Formula Acute lung injury Endothelin—1 (ET—1) Macrophage migration inhibitory factor (MIF) Histologic change。
急性肺损伤(ALI)是心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭，严重者定义为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），是临床常见的急重症病变。作者自2005年7月至2007年7月在益气补肺方临床应用有效的基础上［１］，观察油酸性急性肺损伤大鼠血浆内皮素1（ET—1）和巨噬细胞移动抑制因子（MIF）水平，探讨益气补肺方对ALI的保护机制。
1 材料与方法。
1.1 动物与分组 SD雄性大鼠50只，体重190～245g，平均（220±20）g，（上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，微生物指标符合美国SPF级动物标准），自由饮食，在室温20～23℃ ，湿度45％条件下饲养（浙江中医药大学动物实验研究中心提供）。随机分为中药组(A组)、中+西药组(B组)、西药组(C组)、模型组(D组)、正常组(E组)，每组各10只。
1.2 动物处理及模型制作 灌胃：A组和B组以益气补肺方（生黄芪30g，当归、人参、天冬各6g,五味子、甘草各3g；药物浓度4.5g/ml)，2ml/d灌胃，共3d，其余组灌以生理盐水2ml/d；尾静脉注射：B组和C组尾静脉注射地塞米松1mg/kg（××制药股份有限公司），共3d，余组以生理盐水注入。第3天各组相应处理1h后尾静脉注入油酸0.2ml/kg造模（E组注入生理盐水），造模1h后以2.5%戊巴比妥（2ml/kg）腹腔麻醉后取标本。
1.3 肺系数 取全肺，滤纸吸干表面水分，称湿重，计算肺系数(脏器湿重／体重×100%，重量均以g为单位)，以百分比(％)表示。
1.4 肺组织匀浆ET—1和MIF水平 （1）肺组织匀浆制备：取大鼠右肺中叶约100mg，吸去血液，生理盐水冲洗，液氮研磨后加入1ml的细胞裂解液混匀，4℃12000r/min离心10min，取上清液，—70℃保存待测；（2）采用酶标免疫法：严格按照试剂盒（BIOSOURCE公司生产）说明书操作测定ET—1和MIF值。
1.5 肺组织学 （1）标本制作：取大鼠右肺下叶约1mm×1mm×1mm，以10%甲醛固定24h ，常规脱水、浸蜡、石蜡包埋切片，HE染色，封片；（2）分级标准：光镜下将肺脏组织学改变程度分为无、轻、中和重4级进行比较性研究［２］,比较内容包括毛细血管充血,肺泡腔纤维蛋白渗出,肺泡腔及其间隔中性粒细胞渗出,肺泡间隔增宽（见表1）。
1.6 统计学处理 文中数据用均数±标准差(x±s）表示，计数资料和量化后的等级资料，采用单因素方差分析；组间比较采用独立样本t检验。统计学处理采用SPSS 13.0统计软件包。
表1 肺脏病理改变分级标准（略）。
2 结果。
2.1 肺系数 从表2中可以看出D组肺系数最大，E组最小，其余3组数据在两者之间，5组间差异具有统计学差异（P0.05）。药物处理组间差异不具有显著性（P0.05）。