H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性

【摘要】 目的：探讨H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性。方法：昆明种小鼠尾静脉注射不同数量(1×107、7.5×106、5×106、2.5×106、1×106)H22细胞制作实验性肺转移模型，肉眼及镜下观察肺内肿瘤的有无、大小、转移程度及分布情况，血清ICAM1、IL2蛋白的表达情况。结果：接种1×107细胞浓度组小鼠肺转移率、恶化程度及血清中ICAM1蛋白表达的量均高于其他接种组(P0.01)，IL2蛋白表达低于其他接种组(P0.01)，其中部分小鼠有脑转移。结论：小鼠实验性肺转移的发生率、转移程度及血清中ICAM1、IL2蛋白的表达量与细胞接种数变化密切相关。

【关键词】 肝癌;ICAM1;IL2;实验性肺转移。

Abstract：[Objective]To study correlation cell number of mouse H22 liver carcinoma with occurrence of the experimental pulmonary metastasis.[Method]The Kunming mouse experimental pulmonary metastatic model of different H22 liver carcinoma cell numbers was established by injecting tail vein;distribution，size and grade of metastatic nodes were observed by naked eye and microscope，expressing of ICAM1 and IL2 in blood serum of mouse was detected.[Result]Rate and grade of pulmonary metastasis and expressing of ICAM1 in blood serum were higher for mouse of injecting1×107 cell number than other groups，and lower for expressing of IL2 in blood serum obviously，some had brain metastases among these mice.[Conclusion]The rate and grade of mice experimental pulmonary metastasis and expressing of ICAM1，IL2 are correlated with cell number.

Key words： hepatoma;ICAM1;IL2;experimental pulmonary metastasis。

大量证据表明原发肿瘤早期阶段有恶性肿瘤细胞脱落到循环系统[1]，这些脱落的恶性肿瘤细胞可导致肿瘤复发和转移，外周血循环肿瘤细胞是一个恶性肿瘤扩散的表现，对这些肿瘤细胞的检测可以帮助对肿瘤转移特征的认识及帮助改善肿瘤分期、判断预后、指导治疗、监测治疗效果。由此本实验探讨外周血循环H22细胞数与实验性肺转移的相关性。

1 材料与方法。

1.1 实验材料 鼠白介素2(IL2)定量ELISA试剂盒(美国 Biosource 公司)，鼠细胞间黏附分子1(ICAM1)定量ELISA试剂盒(美国 RD systems 公司);小鼠肝癌H22腹水型细胞株由长海医院中医科实验室提供。

1.2 实验动物 昆明种小鼠，(20±2)g，雌雄各半，共100只。由复旦大学实验动物中心提供。许可证号：SCXK沪20020002。

1.3 实验方法。

1.3.1 小鼠肝癌H22细胞腹水瘤模型的建立 收集指数生长期的小鼠肝癌H22细胞，调细胞浓度为2×107/ml，取健康雄性昆明种小鼠5只，无菌条件下每只腹腔接种细胞悬液0.2 m1，5～7天成腹水瘤模型。

1.3.2 小鼠肝癌H22细胞接种数对实验性肺转移率及转移程度的影响 将小鼠随机分成5组，每组20只，雌雄各半。取指数生长期乳白色小鼠肝癌H22腹水瘤细胞，台盼蓝染色，显微镜下观察细胞存活率95%，常规细胞计数，用生理盐水依次调整浓度为：5×107/ml、3.75×107/ml、2.5×107/ml、1.25×107/ml、5×106/ml。取上述细胞悬液，给予小鼠尾静脉注射，0.2 ml/只。2W后取血脱颈处死全部小鼠，取全肺，用Bouin氏液固定24 h，然后用无水乙醇漂洗至黄色褪去，转移灶呈白色小点，用肉眼观察肺内肿瘤的有无、大小及分布情况，同时观察心、肝、脑、肾、脾、胸腺、肌肉、骨骼组织肿瘤分布情况，并取标本，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，苏木素伊红染色，光镜下观察肿瘤组织分布、大小。肺内肿瘤转移程度参照文献[2]进行分级：大体观察分级：Ⅰ级，单个小的转移灶1～5个(直径均在1mm以下);Ⅱ级，小的转移灶在肺内弥散分布，6～10个或单个中等转移灶(直径在1～2mm之间);Ⅲ级，小的转移灶呈广泛分布(几乎所有肺叶)，或存在几个大的转移灶(直径在2mm以上)。②肺内转移瘤的组织学分级：Ⅰ级，在显微镜下见1～5个小转移灶，灶内偶见核分裂相;Ⅱ级，肺内有5～10个小转移灶;Ⅲ级，肺内广泛分布的小转移灶10个以上。③淋巴结内瘤组织分级：Ⅰ级，淋巴结内的边缘窦内有成堆的癌细胞，形成小的转移灶;Ⅱ级，在淋巴结的边缘窦及中间窦内已形成明显的转移灶。Ⅲ级，淋巴结的大部分由癌细胞所充满，转移灶内常见坏死。