高效液相色谱法测定维生素K1冻干乳中药物含量

【摘要】 目的：建立反相高效液相色谱法测定维生素K1冻干乳中药物含量。方法：冻干乳重建后用异丙醇破乳。采用Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇∶无水乙醇（70∶30）为流动相，检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，进样量20 μL，柱温35 ℃。结果：制剂中辅料对主药测定无干扰，维生素K1在25～250 mg/L范围内峰面积与浓度线性关系良好，平均回收率为100.99%，RSD为0.24%。结论：异丙醇破乳效果良好，且对主药测定无影响。该方法简便、迅速、准确，可用于该制剂的质量控制。

毕业论文。

【关键词】 高效液相色谱法；维生素K1；冻干乳；含量测定。

毕业论文。

［Abstract］ Objective:To determine the content of Vitamin K1 in lyophilized emulsion by reversedphase high performance liquid chromatography.Methods:The reconstituted Vitamin K1 emulsion was mixed with isopropyl alcohol. A Hypersil BDS C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was methanoldehydrated alcohol (70∶30), the UV detector at wavelength 254 nm and the flow rate 1.0 mL/min. The injection volume was 20 μL and the column temperature 35 ℃.Results:The excipients did not interfere with the determination of Vitamin K1. The method proved to be linear within the range of 25～250 mg/L. The recovery of the assay was 100.99% and RSD was 0.24%. Conclusions:Isopropyl alcohol can play a good role in emulsion breaking, meanwhile have no impact on measurement of Vitamin K1. The method appears to be simple, speedy, accurate and can be used to control the preparation quality.

论文代写。

［Key words］ HPLC; Vitamin K1; Lyophilized emulsion; Determination。

毕业论文。

维生素K1为人体肝内合成凝血酶原的必需物质，可促进凝血酶原（Ⅱ因子）及其它凝血因子（Ⅷ因子、Ⅸ因子和Ⅹ因子）的前体物质羧化后转变成凝血酶原及相应因子［1］。临床常用于 治疗 肝硬化引起的消化道出血及新生儿与产妇维生素K1缺乏。但由于维生素K1在水中不溶，其溶液型注射剂含有增溶剂吐温80，该增溶剂易氧化，其氧化产物易引起过敏，用量较大时具有一定溶血作用 ［2，3］。将维生素K1制成冻干乳，临用前加水重建成亚纳米乳可避免现有注射液的安全性、水溶性和稳定性问题。冻干乳剂含乳化剂、冻干保护剂等成分，其含量测定则需要排除这些成分的干扰。本文建立了一种准确、简便的冻干乳中维生素K1的含量测定方法，现报道如下。 论文代写。

1 仪器与试药 代写论文。

LC2010 A型高效液相色谱仪，配备UV/Vis检测器、LCsolution色谱工作站（日本岛津）； 电子 天平（Sartorius）；KLupII10型超纯水机（ 台湾 艾柯）。维生素K1冻干乳（规格：10 mg，自制）；维生素K1对照品（ 中国 药品生物制品检定所，100156 200003）；甲醇、无水乙醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯。 论文网。

2 方法与结果 论文网。

2.1 色谱条件。

色谱柱：大连依利特Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇∶无水乙醇（70∶30）；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm，进样量：20 μL。 论文网。

2.2 储备溶液和对照品溶液的配制 毕业论文。

精密称取维生素K1对照品适量，加异丙醇制成每毫升中含维生素K1 1 000 μg的溶液，摇匀，过滤，取续滤液作为储备液。将储备液以异丙醇稀释10倍作为对照品溶液（100 mg/L）。 毕业论文。

2.3 供试品溶液的制备。

代写论文。

精密量取维生素K1冻干乳适量（相当于维生素K1 10 mg），加水重建成乳状液，置于100 mL容量瓶中，加异丙醇破乳并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 系统适应性试验。

在上述色谱条件下，取对照品溶液（100 mg/L）及供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。维生素K1的保留时间为8.7 min，与相邻成分能完全分离（R1.5）。以药物峰 计算 色谱柱的理论塔板数为7 259。按处方比例及工艺条件制备不含维生素K1的阴性空白冻干乳，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法处理样品，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明，处方中辅料不干扰测定。色谱图见图1。 论文代写。

2.5 标准曲线的制备。

精密量取储备液适量，加异丙醇稀释制成25、50、100、150、200、250 mg/L的系列浓度溶液；分别精密吸取20 μL进样，记录峰面积；以药物浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y=3.81×104X—2.74×104，r2=0.9998，维生素K1在25～250 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系，可采用外标一点法测定药物含量。

2.6 定量限与检测限 毕业论文。

取对照品溶液逐级稀释成适当浓度，吸取20 μL进样，使其主药峰高为噪音峰高的3倍，对应浓度作为其最低检出浓度，并计算得出其最低检出量为25.15 ng。将对照品溶液逐级稀释成适当浓度，吸取20 μL进样，使其主药峰高为噪音峰高的10倍，对应浓度作为其定量限浓度，并计算其定量限为50.30 ng。