云芝多糖、维生素E对小鼠CCl4肝损伤保护作用的研究

作者：孙设宗 唐微 张红梅 赵杰。

【摘要】 目的 观察云芝多糖(CVP)及CVP和VE联合应用对CCl4肝损伤的作用，探讨CVP抗肝损伤的作用机制。方法 4月龄昆明种小鼠60只，随机分为正常对照组、造模组、CVP灌胃高低剂量保护组(300、150 mg)、CVP和VE保护组(VE 250 mg+150 mg CVP、VE 250 mg+300 mg CVP)，每组10只。用CVP灌胃饲料中加VE，饲养7 d，末次灌胃2 h，正常对照组腹腔注射调和油溶液，其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重)，24 h眼球取血后处死小鼠，取出肝脏称重计算肝体指数后制备肝匀浆;测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 与模型组比较，CVP可降低肝体指数及血清中ALT和AST的含量(P0.05，P0.01);提高SOD活性和GSH的含量(P0.01)，降低MDA的含量(P0.001)，与VE联合应用有协同效应。结论 CVP可减轻实验性肝损伤所致炎性浸润，提高SOD的活性和GSH的含量，加速自由基的清除，对实验性肝损伤有保护作用，与VE联合应用有协同效应。

【关键词】 云芝多糖;维生素E;肝损伤;保护作用。

云芝多糖(Coriolus versciclor polysaccharides CVP)具有多种生物活性，可提高抗氧化酶活性、清除自由基以及对氧化应激有抑制和拮抗作用〔1，2〕;维生素E(VE)是经典的抗氧化物质〔3〕。各种原因的肝损伤与氧化应激密切相关，但CVP对肝损伤保护作用及机制的研究报道较少，CVP、VE联合应用对实验性肝损伤保护作用尚未见报道。本文以CCl4制备肝损伤模型，研究CVP单独应用及CVP和VE联合应用抗实验性肝损伤的作用及机制，为拓展CVP和VE的临床应用提供实验依据。

1 材料和方法。

1.1 动物 昆明种4月龄雌性小鼠60只，体重32～38 g/只，本院动物中心提供。

1.2 药品、试剂与仪器 丙二醛(MDA)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)，超氧化物岐化酶(SOD)，谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，其余为国产分析纯生化试剂。ZS831型内切式组织匀浆机(浙西机械厂)，MDF382E型超低温冰箱(日本Sony公司)，722S型分光光度计(上海第二光学仪器厂)，RA50半自动生化分析仪(美国Technicon公司)。

1.3 给药方法 60只小鼠随机分为正常对照组(常规饲料，饮自来水)、病理造模组(常规饲料，饮自来水)、CVP保护组(高、低二组，常规饲料，自由饮水，每天按体重300、150 mg/kg CVP灌胃1次)、CVP+VE保护组(每天按体重150、300 mg/kg CVP灌胃，同时给予饲料中加VE 250 mg/kg饲料，自由饮水)，每组10只。饲养7 d，末次灌胃2 h，正常对照组腹腔注射调和油溶液，其余各组腹腔注射0.15%CCl4调和油溶液(10 ml/kg体重)，24 h后眼球取血，分离血清，用速率法测ALT、AST。

1.4 检测指标 处死小鼠，取出肝脏置冰生理盐水中洗净血液，用滤纸吸去水分称重，计算肝体指数;用pH7.4的PBS按1∶10稀释冰浴下制备肝匀浆，4 000 r/min离心5 min，取上清液用双缩脲法测肝匀浆中蛋白质含量，用PBS稀释成4 mg/ml蛋白，按试剂盒要求测MDA、GSH、SOD的含量。取上述各组肝匀浆按文献〔4〕报道方法略作改进，进行体外抗氧化实验，用722S分光光度计检测波长为532 nm处的吸光度值，以A532 nm反映MDA的含量。计算CVP对MDA产生的抑制率。

1.5 统计学处理 用SPSS 10.0软件进行方差分析，数据用x±s表示。

2 结 果。

2.1 CVP、VE对小鼠CCl4肝损伤模型鼠血清ALT和AST的影响 与对照组比较，模型组CCl4肝损伤小鼠血清ALT和AST活性显著升高(P0.01)，说明制备小鼠损伤模型是成功的。CVP可降低血清ALT活性，与模型组比较无统计学意义;但是CVP可明显的降低小鼠血清中AST的活性(P0.05);VE和CVP联合应用对膜损伤的保护作用加强，与模型组比较ALT、AST显著降低(P0.05，P0.01)。见表1。表1 CVP、VE对小鼠CCl4肝损伤模型血清ALT和AST的影响与模型组比较：1)P0.05，2)P0.01。

2.2 CVP、VE对小鼠CCl4肝损伤模型鼠肝体指数及肝匀浆MDA的影响 小鼠CCl4肝损伤模型组肝体指数增大，说明CCl4肝损伤可导致肝细胞肿胀及炎性浸润，CVP保护组可降低肝体指数，与模型组比较有统计学差异(P0.05)，VE和CVP联合应用有协同作用，但存在量效关系(P0.05，P0.01)。CVP保护组及VE、CVP联合应用均可降低MDA的含量(P0.001)，见表2。表2 CVP、VE对CCl4肝损伤模型肝体指数及肝匀浆MDA的作用与模型组比较：1)P0.05，2)P0.01，3)P0.001，下表同。

2.3 CVP、VE对CCl4肝损伤模型鼠SOD活性及GSH含量的影响 CCl4肝损伤模型组SOD活性和GSH含量明显降低，不同浓度的CVP可增加SOD的活性和GSH的含量，与模型组比较有统计学意义(P0.01)，VE和CVP联合应用与CVP单独应用比较，SOD活性和GSH的含量反而降低，但与模型组比较SOD活性和GSH的含量仍然明显升高(P0.05)。见表3。表3 CVP、VE对CCl4肝损伤模型SOD活性及GSH含量的影响。

2.4 CVP、VE对体外诱导脂质过氧化物产生的抑制作用 模型组A532 nm吸光度值与对照组比较明显升高，说明CCl4肝损伤消耗细胞内的还原当量，抗氧化能力较弱;CVP保护组可增加抗氧化能力，但与CVP浓度并不呈正比，以150 mg CVP保护组对脂质过氧化物产生的抑制作用最强，VE、CVP联合应用抗生素氧化能力增强。见表4。表4 CVP、VE对体外诱导脂质过氧化物产生的抑制率。