直肠癌组织中TAM计数与EMMPRIN、IL8、MCP1表达的相关性
【摘要】 目的 研究直肠癌组织中TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达水平并探讨其相互关系和临床病理意义。方法 41例直肠癌手术切除标本和15例上切缘非癌粘膜组织常规制作石蜡包埋切片，免疫组化分别染TAM、EMMPRIN、IL8和MCP1。结果 癌组织TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达阳性率明显高于非癌组织；高、中分化腺癌和肿块最大径≤5cm病例，TAM计数明显低于低分化腺癌和肿块最大径5cm病例；癌细胞未浸及浆膜层病例TAM计数及EMMPRIN、MCP1表达阳性率明显低于癌细胞浸润浆膜层病例；无淋巴结转移病例TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达阳性率明显低于淋巴结转移病例；EMMPRIN、IL8和MCP1表达阳性直肠癌TAM计数明显高于阴性病例；直肠癌中EMMPIN、IL8和MCP1表达之间存在密切正相关系(P0.05)。结论 TAM计数及EMMPRIN、IL8和MCP1表达可能是反映直肠癌发生发展，生物学行为和预后的重要标记物。
【关键词】 直肠癌；肿瘤相关巨噬细胞；细胞外基质金属蛋白酶诱导因子；化学趋化因子；免疫组织化学。
Key words：Rectal cancer; Tumorassociated macrophage； Extracellular matrix metalloproteinase inducer; Chemokines; Immunohistochemistry。
癌组织内浸润的巨噬细胞称肿瘤相关巨噬细胞(tumorassociated macrophage, TAM), 近年发现TAM浸润数量与恶性肿瘤生物学行为和预后密切相关[1，2]。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer, EMMPRIN)能诱导基质金属蛋白酶的生成，与恶性肿瘤侵袭潜能，转移发生及预后密切相关[3，4]。化学趋化因子已发现50余种，均为小分子蛋白质，IL8属CXC亚家庭主要成员，单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein1, MCP1)为CC亚家族主要成员。近年发现IL8和MCP1表达水平也与恶性肿瘤发生进展、血管生成及预后密切相关[510]。作者应用免疫组化方法研究TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达水平，探讨它们之间的相互关系及其临床病理意义。
1 资料与方法。
1.１ 临床病理资料。
收集我院2001年1月～2003年6月直肠癌手术根治术标本41例，男22例，女19例，34～80岁，平均年龄(56.9±11.9)岁。病理类型：腺癌36例，印戒细胞癌3例和粘液腺癌2例。分化程度：高分化6例，中分化28例，低分化7例；癌细胞未浸及浆膜层6例，浆膜层35例。肿块最大径5cm 28例，5cm 13例；有26例发生区域淋巴结转移。另收集15例相同直肠癌根治术标本上切缘的非癌直肠粘膜组织，HE染色，光镜观察粘膜上皮轻度不典型增生3例，中度和重度不典型增生各2例，8例为完全正常肠粘膜。上述标本经10%福尔马林固定后常规制作石蜡包埋连续切片，4μm厚。
１．2 主要试剂。
鼠抗人CD68单克隆抗体，免抗人EMMPRIN、IL8、MCP1多克隆抗体，生物素标记羊抗鼠IgG，生物素标记羊抗兔IgG，ABC试剂，以及DABHCL显色试剂盒均购自武汉博士德公司。
１．3 方法。
TAM、EMMPRIN、IL8和MCP1染色方法均为常规ABC免疫组化法。TAM免疫组化反应产物定位于胞浆和胞核， 见图1，EMMPRIN，IL8和MCP1免疫组化反应产物定位于胞浆，见图2～4。TAM计数方法参照Ohno法，高倍镜下随机观察10个癌组织视野，计数各视野内TAM数，均值为该病例TAM计数[1]。将切片中EMMPRIN、IL8和MCP1阳性细胞率≥20%为阳性病例，20%为阴性病例。以博士德公司提供的阳性切片作为阳性对照，以0.01 MPBS液(pH 7.4)替代一抗作为阴性对照。
1.4 统计学处理 将所得数据输入SPSS10.0软件包进行t检验、χ2检验，Fischer精确概率法及等级相关分析，检验水准α=0.05。
2 结果。
41例直肠癌TAM计数为（26.8±8.5）个/HP，15例残端非癌肠组织为（16.4±7.2）个/HP，两者存在高度显著差异(t=4.33, P0.01)。高分化、中分化腺癌及浸润至肌层、肿块最大径≤5cm和无淋巴结转移病例TAM计数明显低于低分化(高分化：t=3.89, P0.01；中分化：t=2.77, P0.01)、浸润至浆膜层(t=2.67, P0.01)、肿块最大径5cm(t=2.62, P0.01)及淋巴结转移病例(t=2.68, P0.01)，见表1。
41例直肠癌EMMPRIN、IL8和MCP1阳性表达病例分别为24例(58.5%)、23例(56.1%)和28例(68.3%)，15例残端非癌肠组织阳性病例分别为4例(26.7%)、3例(20.0%)和4例(26.7%)，均存在显著或高度显著差异(EMMPRIN:χ2=4.46, P0.05; IL8:χ2=5.75, P0.05, MCP1:χ2=7.77, P0.01)。高分化、中分化腺癌及浸润至肌层、肿块最大径≤5cm和淋巴结未转移病例EMMPRIN、IL8和MCP1表达阳性率较明显低于低分化，浸润至浆膜层及淋巴结转移病例，见表1，但与患者性别、年龄、病理类型等其他临床病理特征无明显关系(P0.05)。
EMMPRIN、IL8和MCP1阳性病例TAM计数均明显高于其阴性病例，均有高度显著性差异(P0.01)，见表2。24例EMMPRIN阳性病例中IL8阳性17例和MCP阳性20例，17例EMMPRIN阴性病例中IL8阴性11例和MCP1阴性9例，EMMPIN与IL8、MCP表达呈密切关系(IL8:χ2=5.10, P0.05; MCP1:χ2=6.05, P0.05)；23例IL8阳性病例中MCP1阳性19例，18例IL8阴性病例中MCP1阴性9例，两者表达存在密切关系(χ2=4.96, P0.05)。表1 TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达与直肠癌临床病理特征关系 注：与低分化、浸润浆膜层，肿块最大径5cm及淋巴结转移病例比较，*P0.05,**P0.01表2 直肠癌中EMMPRIN、IL8、MCP1阳性病例TAM计数与阴性病例比较。
3 讨论。
本组资料发现直肠癌组织中TAM计数明显高于非癌直肠粘膜组织，且高中分化腺癌、癌细胞浸润至肌层、肿块最大径≤5cm和无区域淋巴结转移病例TAM计数均明显低于低分化、癌细胞浸润至浆膜层、肿块最大径5cm和区域淋巴结转移病例，均有高度显著差异(P0.01)，其结果与国外文献报道一致。提示TAM计数可能是反映直肠癌发生发展、转移状况及预后的重要生物学标记物，TAM计数高的直肠癌恶性度高、进展快、易发生淋巴结转移及预后差。