低分子肝素对大鼠脑局灶性缺血再灌注后Bcl2，Bax表达的影响及
作者：高素玲，王大力，常莉莎，赵晓晶，张丽。
【摘要】 目的：观察低分子肝素对大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Bcl2,Bax表达的 影响 及保护作用. 方法 ：①选用雄性SD大鼠54只，体质量280～330 g. 应用 随机数字表法将大鼠分为3组：假手术组、缺血再灌注组和低分子肝素组，每组18只. ②应用免疫组化方法测定海马CA1区神经元细胞凋亡基因Bcl2,Bax表达情况. ③采用两样本均数的t检验对两组间数据进行 分析 . 结果：大鼠54只均进入结果分析，缺血再灌注组大鼠脑缺血再灌注6，12，24 h时Bcl2蛋白在神经元内表达的阳性细胞数较低分子肝素组同一时间点明显减少，两组比较具有显著的统计学意义（P0.05）. 缺血再灌注组大鼠脑缺血再灌注6，12，24 h时Bax蛋白表达的阳性细胞数较低分子肝素组同一时间点明显增加，两组比较具有显著的统计学意义（P0.05）. 结论：脑缺血再灌注损伤随再灌注时间延长而加重，低分子肝素可能通过减少Bax蛋白的表达，上调Bcl2蛋白表达，从而减轻神经元的损伤及凋亡，起到脑保护作用. 代写论文。
【关键词】 大鼠。
0引言 毕业论文。
大脑中动脉是缺血性脑血管病的易患部位， 在脑梗死患者中大脑中动脉主干分布区梗死占82.2％［1］，我们通过制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型，观察低分子肝素对大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Bcl2,Bax表达的影响及保护作用.
1.1材料雄性 SD大鼠54只，清洁级，3～4 mo龄，体质量280～330 g［华北煤炭医学院动物实验中心，许可证号scxk（冀）20050001］. 动物饲养环境 自然 光照，环境安静，温度适中. 应用随机数字表法将大鼠分为3组：假手术组、缺血再灌注组、低分子肝素组，每组18只. 低分子肝素(速避凝，杭州赛诺菲圣得拉堡民生制药有限公司)；Bcl2, Bax试剂盒、PV6001(兔二步法)、DAB 显色剂、PBS试剂盒、APES粘片剂、EDTA修复液（北京中杉金桥生物技术有限公司）；苏木素、伊红、多聚甲醛和无水乙醇（本院病理教研室）；CMIAS真彩医学图像分析系统(北京航空航天大学研制)；Olympus摄像显微镜(日本)；KPJ1烤片机(天津)；LEica石蜡切片机(德国)；LY3型切片机(上海)；微量液体加样器(上海)；数码温控微波炉(天津)；手术操作台(自制)；60℃～100℃水育箱(上海).
1.2.1模型制作采用改良Longa等［2］ 法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型. 造模成功评估标准：①提尾时大鼠左前肢内收屈曲；②爬行时向左侧倾倒或按逆时针方向转圈; ③ 右眼Horner征. 论文网。
1.2.2分组干预假手术组只游离右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉. 缺血再灌注组和低分子肝素组均建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型 . 缺血2 h后分别腹腔注射生理盐水1 mL和皮下注射低分子肝素（200 U/kg，用生理盐水稀释至1 mL），两组均于缺血2.5 h后开始再灌注6，12，24 h，每个时间点取6只进行观察. 论文网。
1.2.3标本采集与检测将大鼠在各个时间点经腹腔注射100 mL/L水合氯醛（0.003～0.004 mL/g） 再次麻醉，固定四肢及头部，迅速打开胸腔暴露心脏，剥离心包，将灌注针头自左心室插入到升主动脉，固定针头，剪开右心耳，依次灌注生理盐水100 mL，40 g/L多聚甲醛(0.01 mol/L PBS，pH 7.4) 500 mL，待肝脏变白变硬后，将大鼠断头取脑，去除嗅球、脑干、小脑，以视交叉和其后4 mm处两点冠状切片，取脑组织块，置4℃，40 g/L多聚甲醛24 h，常规脱水，包埋制成蜡块. 石蜡切片厚度5 μm，40℃水浴展开，用经粘片剂处理过的载玻片捞片，置于60℃烤箱中烘烤1h，再行HE染色和免疫组织化学染色. 石蜡切片脱蜡至蒸馏水，EDTA微波热修复，维持煮沸10 min，冷却至室温，3 mL/L H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶10 min，用PBS洗3次，每次洗3 min，正常山羊血清封闭内源性抗原20 min，滴加适当稀释（1∶100）的一抗，40℃过夜，PBS洗3次，每次洗3 min，滴加抗兔HRP多聚体，在37℃放置40 min，DAB显色镜检控制. 应用医学图像分析系统及摄像显微镜记录Bcl2，Bax阳性细胞数，阳性部位位于细胞质，计数4个不重复高倍视野(×200)中阳性细胞数目， 数值用x±s表示. 代写论文。
1.2.4主要观察指标观察各组不同时间点Bcl2,Bax阳性细胞数.
统计学处理: 采用SPSS 11.5软件进行统计处理，结果以x±s表示，采用两样本均数的t检验对两组间数据进行分析. 代写论文。
2结果。