天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱鉴别及淫羊藿苷的含量测定

作者：朱洁，肖海涛，郝小燕 罗俊，官志忠。

【关键词】 天参益智胶囊 质量标准 薄层鉴别 淫羊藿苷 高效液相色谱法。

Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Tianshenyizhi Capsule. MethodsHerba Epimedii, Radix Angelicae Sinensis, Rhizoma Acori Tatarinowii, Radix Polygoni Multiflori cum Succo Glycines Sotae in Tianshenyizhi Capsule were identified by TLC, and the content of icariin was determined by HPLC. ResultsThe identification method was highly exclusive. Icariin showed a good linear relationship in the range of 0.322～1.61μg, and r=0.999 98. The average recovery was 100.7%, RSD= 1.43% (n= 9). ConclusionThe method is accurate and simple with good reproducibility, and it can control the quality of this preparation effectively.

Key words：Tianshenyizhi Capsule; Quality Standard; TLC; Icariin; HPLC。

天参益智胶囊是在大量传统经验验方的基础上，研发的一种治疗老年性痴呆疾病的中药制剂。经过初步药效学研究表明［1，2］，该复方对痴呆大鼠学习记忆能力有明显的改善作用，对胆碱能功能减退有较好的保护和治疗作用，可显著降低老年痴呆大鼠海马和皮质中兴奋性谷氨酸含量，拮抗谷氨酸介导的神经毒性作用，延缓衰老和防治老年痴呆。为研究该产品的质量标准，我们对制剂中的淫羊藿、当归、石菖蒲、何首乌4味药材的薄层鉴别方法进行了研究，并以其中的淫羊藿苷作为指标性成分进行了含量测定。

1 仪器与试药。

1.1 仪器 　　HP1100高效液相色谱仪（包括HP1100泵，HP1100紫外检测器，HP1100柱温箱，HP1100/WND—3D工作站），QY—20三用紫外分析仪（上海市闻天仪器设备有限公司），KQ—250B型超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂与药品。

D—101型大孔吸附树脂（天津农药股份有限公司树脂分公司），硅胶（青岛美晶化工有限公司），氧化铝（200～300目，上海新诚精细化工有限公司），淫羊藿苷对照品、当归对照药材、石菖蒲对照药材、何首乌对照药材（由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为110737—200312，120927—200615，121098—200403，120934—200507）。乙腈为色谱纯，水为超纯水和蒸馏水，其余试剂均为分析纯。天参益智胶囊（自制0.3 g/粒，批号：200609011，200609012，200609013）。

2 方法与结果。

2.1 薄层鉴别。

2.1.1 淫羊藿的鉴别。

取胶囊内容物3 g，加95%乙醇30 ml，超声30 min，滤过，滤液水浴挥干，残渣加1 ml乙醇溶解，作为供试品溶液。取缺淫羊藿阴性样品3 g和淫羊藿药材1 g，同法制备缺淫羊藿阴性样品溶液和淫羊藿药材对照溶液。取淫羊藿苷对照品用甲醇制成1 mg·ml—1的对照品溶液。分别吸取供试品溶液和缺淫羊藿阴性样品溶液各10 μl，淫羊藿药材对照溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶H板上，以氯仿—甲醇—甲酸（15∶1∶0.2）为展开剂，展开2次，取出晾干。喷以5%三氯化铁乙醇液，晾干。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。结果见图1。

2.1.2 当归的鉴别。

取胶囊内容物3 g，置于100 ml的烧杯中，加入水60 ml煎煮1 h，滤过，滤液水浴挥至适量，用石油醚萃取3次，20 ml/次，合并萃取液，水浴挥干，残渣加入醋酸乙酯1 ml使溶解, 作为供试品溶液。另取当归药材1 g，同法制成药材对照溶液。取缺当归阴性样品3 g同样品法制备缺当归阴性样品溶液。参照薄层色谱法［3］试验，吸取供试液和阴性样品溶液各10 μl，当归药材对照溶液5 μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶板GF254上,用正己烷—醋酸乙酯 (10∶1)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，样品与药材色谱相应的位置处显相同荧光的斑点，阴性样品无干扰。结果见图2。

2.1.3 石菖蒲的鉴别。

取胶囊内容物3 g，置于100 ml的烧杯中，加入水60 ml煎煮1 h，滤过，滤液水浴挥至适量，用石油醚萃取3次，20 ml/次，合并萃取液，水浴挥干，残渣加入醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.5 g，同法制成药材对照溶液。取缺石菖蒲阴性样品3 g，同样品法制备缺石菖蒲阴性样品溶液。参照薄层色谱法［3］试验，吸取供试液和阴性样品溶液各10 μl，石菖蒲药材对照溶液5 μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，用石油醚—醋酸乙酯 (8∶1)为展开剂，展开，取出晾干， 喷以10% 的磷钼酸乙醇溶液，于105℃烘烤至斑点清晰。样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。结果见图3。

2.1.4 何首乌的鉴别。

取胶囊内容物3 g，置于100 ml烧杯中，加入蒸馏水50 ml煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至适量，用氯仿萃取3次，30 ml/次，合并萃取液，水浴挥干，残渣加入甲醇1 ml使溶解, 作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5 g，同法制成药材对照溶液。取缺何首乌阴性样品3 g同样品法制备缺何首乌阴性样品溶液。参照薄层色谱法［3］试验，吸取供试液和阴性样品液各10 μl，药材对照溶液3 μl， 分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的高效硅胶G板上，以氯仿—丙酮(7:1)为展开剂，饱和15 min，展开约3.5 cm左右，取出晾干，再以环己烷—醋酸乙酯(10:0.5) 为展开剂, 饱和15 min，展开，取出晾干,置氨蒸气中熏至斑点清晰。样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。结果见图4。

2.2 淫羊藿苷的含量测定。

2.2.1 色谱条件［3］。

色谱柱为DiamonsilTM C18（5 μm，250 mm× 4.6 mm）；流动相为乙腈—水 (30∶70)；流速1 ml·min—1；进样量10 μl；波长270 nm；柱温40℃。