半夏生品及不同炮制品中多糖的含量分析
作者：杨武德，李晶晶，李伟，王建科。
【摘要】 目的探讨和分析不同炮制方法对半夏中多糖含量的影响。方法硫酸—苯酚显色后用分光光度计测定吸光度，（测定波长491nm）。按照回归方程计算含量。结果半夏生品及其六种炮制品中多糖的含量顺序为：法半夏（石灰甘草制）姜半夏（姜矾煮制）清半夏（矾煮）清半夏（矾泡）生半夏贵州法半夏姜半夏（姜炒）。结论不同炮制方法对半夏中多糖的含量有显著影响（P0.05,P0.01或P0.001）。
半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Breit.的干燥块茎。它具有镇咳、镇吐、抗早孕、保护胃黏膜［1］等多重功效，是临床上常用的镇咳祛痰药。半夏多糖对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)、小鼠艾氏腹水瘤(EAC)有抑制作用；半夏多糖可诱导人神经母瘤细胞(SH．SY5Y )、鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12)凋亡、对鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12)有抑制生长及增殖作用,即半夏中的多糖成分具有抗肿瘤作用［2］，当前肿瘤的发病率很高，传统的化疗和放疗治疗手段会导致强烈恶心、呕吐，因此进一步了解半夏这一具有止呕和抗癌双重功效的天然药物具有一定的现实意义。本文采用硫酸—苯酚法测定半夏生品及炮制品中多糖。
1 仪器与药材。
1.1 仪器UV—2501PC紫外分光光度计(日本岛津)，ABZ04—S型电子分析天平(万分之一，瑞士梅特勒—托利多公司)，AE240—型电子分析天平(十万分之一,瑞士梅特勒—托利多公司)。
1.2 试剂98%浓硫酸(分析纯)，5%苯酚(重蒸)，对照品葡萄糖。
1.3 药材半夏药材购于贵阳花果园药材市场，产地:贵州安顺，经本院生药教研室董立莎教授鉴定为正品Pinellia ternate (Thunb.) Breit.
1.4 半夏不同炮制品的制备［3，4］。
1.4.2 清半夏(矾泡)取大小分档的净半夏，用8%的白矾水浸泡至内无干心，口尝微有麻舌感，取出，洗净，60℃干燥。打粉(过40目筛)备用。
1.4.3 清半夏(矾煮)取大小分档的净半夏，用凉水浸漂，避免日晒，根据其产地及大小斟酌调整浸泡日数。泡至10 d后，如起白沫时,每100 g半夏加白矾2 g，泡1 d后再换水，至口尝无麻辣感后，加白矾与水共煮，取出，晾至6成干，焖润后干燥,打粉(过40目筛)备用。每100 g半夏，用白矾12.5 g。
1.4.4 姜半夏(姜矾煮制)取大小分档的净半夏，用水浸泡至内无干心；另取生姜片煎汤，加白矾与半夏共煮透取出，60℃烘干，打粉(过40目筛)备用。每100 g半夏，用生姜25 g，白矾12.5 g。
1.4.5 姜半夏(姜炒)取鲜姜切片煎水去渣，拌入半夏片内，晾七成干，用微火炒至稍变黄。 60℃干燥，打粉(过40目筛)备用。每100 g半夏用鲜姜12 g。
1.4.6 法半夏(石灰甘草制)取大小分档的净半夏，用水浸泡至内无干心，取出；另取甘草适量加水煎煮两次，合并煎液，倒入适量用水制成的石灰液中，搅匀，加入上述已浸透的半夏，浸泡，搅拌1～2次/d，并保持pH值在12以上，至剖面黄色均匀，口尝微有麻舌感时，取出，洗净取大小分档的净半夏，用水浸泡至内无干心， 60℃烘干。 打粉(过40目筛)备用。每100 g半夏用甘草15 g，生石灰10 g。
1.4.7 法半夏(贵州法半夏) 取大小分档的净半夏，用水浸泡至内无干心, 再用5%的石灰水泡5～7 d，然后用生姜汁泡5～7 d。再用甘草汁泡5～7 d，最后至口尝微有麻辣感时取出洗净。60℃烘干，打粉(过40目筛)备用。每100 g 半夏，用生姜20 g，甘草20 g ，石灰10 g 。
2 方法与结果。
2.1 对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖25.10 mg置于250 ml的容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀备用。再精密量取6.0 ml定容到100 ml的容量瓶中摇匀制成0.060 2 mg/ml的对照品溶液。
2.2 苯酚溶液的配制称取苯酚150 g，镁片0.3 g，碳酸氢钠0.3 g，置于圆底烧瓶中，再整个放入沙锅内蒸馏，收集182℃馏分，称取20 g加水稀释至400 ml置于棕色瓶中，避光保存。
2.3 标准曲线的绘制精密吸取葡萄糖对照品溶液0.2 ，0.5，0.8，1.1，1.4，1.7 ml置于10 ml的比色管中，体积不足2.0 ml的用蒸馏水补足，分别精密加入5%的苯酚溶液1.0 ml，浓硫酸5 ml摇匀，放置5 min，再置于沸水浴中15 min，取出置冷水浴中放置5 min，取出，以蒸馏水为空白，于491 nm波长处测定吸光度。以浓度(mg/ml)为横坐标，吸光度(Abs)为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A=52.092C—0.025 3，r=0.999 4；结果表明葡萄糖在0.001 506～0.012 801 mg/ml的范围内含量与吸光度有良好的线性关系。
2.4 换算因子的测定。
2.4.1 半夏多糖的提取与精制精密称取以干燥的半夏粉末24.703 2 g，置于150 ml索式提取器中加入石油醚(60～90℃)的回流提取4 h，弃提取液(脱脂)。药粉挥干溶媒后，加入8倍量80%的乙醇水浴回流提取3次(4，3，2 h)以除净单糖，低聚糖及醇溶性杂质。药粉挥干溶媒，置于圆底烧瓶中100℃水浴提取3次(3，2，1 h)，合并药液，浓缩，用少量蒸馏水稀释后再用Sevage(正丁醇∶氯仿=4∶1)脱蛋白，离心（3 000 r/min）15 min ，得液，流水透析24 h，加入无水乙醇使乙醇含量达到80%，在冰箱中（4℃）放置24 h，离心得多糖；再分别用丙酮、氯仿及无水乙醇依次反复冲洗多次，60℃干燥至恒重，得精制多糖粉末备用。
2.4.2 换算因子的测定精密称取60℃干燥至恒重的半夏精制多糖粉末30.00 mg，置于100 ml的容量瓶中，溶解，摇匀，加蒸馏水稀释至刻度再摇匀。分别精密吸取5份，每份0.3 ml置于10 ml的具塞比色管中，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线项下操作测定吸光度，平均换算因子为f=1.207，RSD=3.45%（n=5）。公式为：换算因子f= W/(C×D) 式中：W为多糖的质量(mg)；C为样品中葡萄糖浓度(μg/ml)；D为稀释因素。