大蒜多糖组分A总多糖含量的分光光度法测定
作者：余薇，查文良，梁惠敏，吴基良，刘彤云。
【摘要】 目的 对大蒜多糖组分A进行提取并测定其含量。方法采用0.5%草酸铵溶液提取、醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分A，以苯酚—硫酸显色法测定大蒜多糖组分A的含量。结果在2.0～15.0 μg/ml内，浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程：A=0.080 6C—0.021 9 (r=0.993 4，n＝10)，平均回收率为96.14％ ，RSD％为0.06（n＝5）。大蒜多糖组分A的平均糖含量为77.40% ，RSD％为3.74（n＝5）。结论方法简便，结果准确，为今后对大蒜多糖的药理作用以及其它组分进一步研究奠定良好的基础。
【关键词】 大蒜多糖组分A; Sevage法; 苯酚—硫酸法； 多糖。
Abstract：ObjectiveThe polysaccharides A were extracted from garlic and the content was determined. MethodsPolysaccharides A was extracted and purified through 0.5% ammonium oxalate and ethanol precipitation, the content was determined by phenol—sulfuric acid under 485 nm. ResultsFrom the range of 2.0—15.0μɡ/ml, there was an excellent linear shape between the concentration and absorbency. The regression equation: A=0.0806C～0.0219,（r=0.9934，n＝10）.The average recovery was 96.14% with RSD=0.06% (n=5). The average polysaccharides content from garlic was 77.40%,RSD=3.74% (n=5). ConclusionThe method is simple and accurate.
Key words：Garlic polysaccharides A; Sevage; Phenol—sulfuric acid。
大蒜为百合科葱属多年生草本植物，明代《本草纲目》记载大蒜有散痛肿、除风邪、杀毒气、祛风湿、疗毒癣、健脾胃、止霍乱、解瘟疫等功效［1］，可治疗数十种疾病。大蒜多糖是大蒜的醇沉部分，具有大蒜多糖组分A，B和C成分，本科室通过大量实验研究发现大蒜多糖具有抗氧化、清除氧自由基、保护心肌的作用［2，3］。因此，大蒜多糖糖含量的测定是探讨其组效关系的重要前提。本文从大蒜中分离纯化出大蒜多糖组分A成分，通过紫外分光光度法测定样品中总多糖含量［4，5］，以期更好地控制多糖的质量。
1 器材。
1.1 药材市售山东产大蒜。
1.2 试剂。
葡萄糖标准品，上海化学试剂公司产品；苯酚，上海化学试剂公司产品；硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司产品；95％ 乙醇；蒸馏水。
1.3 仪器。
UV—754型紫外可见分光光度计；FA1104电子分析天平。
2 方法与结果。
2.1 大蒜多糖组分A的分离纯化取新鲜大蒜去皮碾碎，无水乙醇浸泡脱脂，在沸水浴中用4～5倍0.5%草酸铵溶液提取8 h，滤液以冰醋酸调节pH值至4.5，乙醇醇析得大蒜多糖组分A 粗品，用Sevage法去蛋白，在55 ℃下干燥至恒重得大蒜多糖组分A 精制品，得率为12.94%。纯化后的大蒜多糖进行了紫外可见光谱段扫描，结果显示在260和280 nm 处无吸收，表明大蒜多糖组分A中无蛋白质成分，而在190 nm处有多糖的特异性吸收峰。 见图1。
2.2 试剂的配制。
2.2.1 标准品溶液的制备。
精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖10.0 mg置100 ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100 μg/ml的标准品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备。
精密称取55 ℃干燥至恒重的大蒜多糖组分A 10.0 mg置100 ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100 μg/ml的多糖供试品液。
取苯酚100 g，加铝片0．2 g和NaHCO3 0.1 g，蒸馏。收集180～182℃ 馏分，精密称取精制苯酚5.0 g溶解后转至100 ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。
2.3 检测波长的选择。
精确量取80 μg/ml的葡萄糖溶液1.0 ml，样品溶液1.0 ml置干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0 ml摇匀，然后加入浓H2SO4 5.0 ml摇匀，另以1.0 ml水作同上操作，作为空白液，于室温中放置5 min，沸水浴中恒温15 min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长200～800 nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在485 nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长处无干扰，故选用485 nm 为检测波长。见图2～3。