山东小麦蠕孢根腐病病原鉴定及致病力分析
公司 gl K试剂盒提取菌株基因组作模板用通用引物（5′GGGGGGG3′）和R（5′GGG3′）扩增r序列。
R扩增条件9℃预变性 ；9℃变性30 56℃退火30 7℃延伸33 30热循环；7℃终延伸0。
用上海生工公司r柱式胶回收试剂盒回收目片段连接体化肠杆菌感受态5α送由上海博尚公司完成测序。
通B对序列进行Bl分析。
选用麦济南5作接种寄主待麦长至叶心期用接种针挑取离蠕孢菌然麦茎部刺伤接种。
接种伤口处喷水以利病菌侵染。
将接种麦放置塑箱体箱体顶部覆盖塑膜。
光照条件8 光照6 黑暗相对湿控制80%左右。
接种7 统计发病植株数量测量病斑长计算发病率和平病斑长。
发病率（%）发病植株数量总接种植株数量×00平病斑长∑（每接种植株病斑长）总接种植株数量。
利用 705软件’新复极差法对不菌株平病斑长进行显著性差异分析并采用G法对菌株致病力进行系统聚类分析。
结与分析菌株形态学鉴定供试菌株培养基上8℃培养菌落近圆形深榄褐色菌落边缘菌丝白色气生菌丝生长繁茂白色（图）。
镜检观察分生孢子梗细长多隔膜无分支上部呈屈膝状弯曲。
分生孢子多细胞具假隔膜黑褐色长梭形或纺锤形直或弯曲两端渐细（图B）。
初步确定供试5菌株麦根腐离蠕孢[Blr rk（）kr]属半知菌亚门离蠕孢属真菌。
菌株分子鉴定用通用引物R扩增得到条约600 b条带（图）测序结显示供试5菌株r序列586 b。
B上进行Bl分析结表明所有菌株序列与GBk登录K06699Blr rk高性99%以上。
菌株比对发现序列有99%以上都是致由看山东省不地理麦根腐病离蠕孢菌种遗传上是高保守。
3菌株致病力供试麦根腐离蠕孢菌株接种7 调发现所有菌株接种发病率00%说明5菌株有致病性。
由图3可以看出这些菌株虽然都有致病性但平病斑长有所不其LL菌株平病斑长长可达37 而3菌株仅0。
显著性水平分析结表明5菌株致病力存差异说明山东不麦根腐病离蠕孢菌株存致病力分化现象。
对5麦根腐离蠕孢菌株致病力进行聚类分析由图可以看出致可聚类3分支。
Ⅰ分支有Q、Q、、3、6、、、3和Z共9菌株弱致病力菌株占供试菌株36%；Ⅱ分支有6菌株分别是LL、、、5、6和强致病力菌株占供试菌株%；Ⅲ分支等致病力菌株共0菌株占供试菌株0%。
因山东麦根腐病离蠕孢菌可分强、、弱3种致病力类型菌株其等致病力菌株占优势。
外由图还可以看出潍坊昌邑（）、德州惠民（）和烟台海阳（）有强、、弱3种致病力类型菌株也就是说地理不菌株致病力存分化。
3讨论与结论真核生物r8、58和8序列高保守是位8588非编码录隔区其进化程承受选择压力较相对进化速较快因序列既具有保守性又具有序列多态性能够有效地用病原微生物分类鉴定。
研究首先通传统形态学鉴定对5麦根腐病菌株菌落、分生孢子梗及分生孢子形态进行观察初步确定麦根腐离蠕孢。
进步利用分子鉴定方法扩增其r序列进行Bl比对分析结表明所有菌株序列与登录K06699Blr rk性99%以上因这5菌株被鉴定麦根腐离蠕孢菌与形态学鉴定结致。
张德珍等[5]也利用形态学鉴定方法和扩增序列分子鉴定方法成功地对山东省麦根腐病病原蠕孢菌进行了鉴定。
研究通刺伤接种法将麦根腐离蠕孢接种麦幼苗结表明5麦根腐病离蠕孢菌都有致病性但存致病力差异可分强、、弱3种致病力类型其等致病力菌株优势菌占总菌株数0%。
目前普遍认Blr rk是种致病性具有较高变异水平真菌[78]。
l[7]、ggrl[9]等研究都发现供试Brk菌株有致病性但致病力有所不这与研究结致。
对麦根腐离蠕孢易变异特l[0]认这是由Brk异核现象和准性循环造成等[8]研究还发现有两细胞核菌株致病力较强其他致病力程菌株多3～细胞核因他们认Brk表现出致病力多样性可能与细胞核不组合有关。
研究还可以看出5麦根腐病离蠕孢菌株3菌株致病力弱其侵染平病斑长仅有0。
外我们还发现采地区不菌株致病力存差异而属致病力类型菌株也可以是不地区由说明山东省不麦根腐病离蠕孢菌株致病力差异与其地理没有相关性。
又因麦根腐离蠕孢菌致病性上有较高变异性故而增加了麦根腐病防治困难因生产上选用抗病品种、定期轮换品种是防治麦根腐病有效手段。
参考献[]张庆平李子钦张建平等 国外麦根腐病研究概况[] 蒙古农业科技996（）7[]ll rz g r r r lr g[] l 983 67 795797[3]袁淑芳 麦根腐病蠕形菌寄主围试验[] 植物保护983（）9[]冯杰郭会芳徐瑞福 高产麦区麦根腐病病原菌鉴定及综合防治技术[]马万杰原国辉李洪连 河南省植保学会十次、河南省昆虫学会九次、河南省植病学会四次会员代表会暨学术讨论会论集 洛阳河南省植物保护学学会、河南省昆虫学会、河南省植物病理学会出版03[5]张德珍李鹏昌陈晓霞等山东省麦根腐病病原菌分离鉴定[] 植物保护学报063（）330[6]徐丽陈新魏海蓉等 核桃种质r 序列分析[] 山东农业科学068（3）[7]l K r L l llr rkr ggrv r r gr Blr rk l g bl （rv L）[] rr rblg 007 55 35[8] R g V l Vrbl rbbl rl l bl g Blr rk （v L） [] rl l r 003 0 735[9]ggrl R g V B Grr l r vr l Blr rk g b rlglg llr rr[] 009 6（） 960[0]l R lbl v V rk rxl[] rl B 96 0 537