广西产美味猕猴桃根醋酸乙酯部位化学成分的研究

作者：梁洁，甄汉深，张薇薇，李生茂，王新盛，梁臣艳，韦志英。

【摘要】 目的研究广西产美味猕猴桃根醋酸乙酯部位的化学成分。方法用色谱法分离，用波谱方法及理化性质鉴定结构。结果从美味猕猴桃根醋酸乙酯部位中分离鉴定了3个化合物：分别鉴定为β－谷甾醇（Ⅰ），熊果酸（Ⅱ），胡萝卜苷（Ⅲ）。结论化合物Ⅱ为首次从该植物中分离得到。

【关键词】 广西产美味猕猴桃根； 醋酸乙酯部位； 化学成分。

Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of ethyl acetate extract in the roots of Actinidia deliciosa C.F.Liang et A.R.Ferguson in Guangxi. MethodsChromatographic methods were used to isolate compounds from ethyl acetate extract in the roots of Actinidia deliciosa C.F.Liang et A.R.Ferguson and chemical and spectral methods were used to elucidate the structures of the isolated compounds.ResultsThree compounds were identified as β—sitosterol(Ⅰ)，ursolic acid (Ⅱ)， Daucosterol (Ⅲ). ConclusionCompound Ⅱ was obtained from the plant for the first time.

Key words：Actinidia deliciosa C.F.Liang et A.R.Ferguson in Guangxi； Ethyl acetate extract； Chemical constituents。

美味猕猴桃Acitinidia deliciosa C.F.liang et A.R.Ferguson为猕猴桃科猕猴桃植物。性寒味酸、甘，有小毒，具有清热、利尿、活血、消肿的功效［1］ ，主要分布在湖南、广西、江西、陕西等地。有实验表明，美味猕猴桃根提取物具有抗肿瘤和保肝作用［2～5］ 。为了进一步明确美味猕猴桃根的抗肿瘤活性成分，本课题对广西产美味猕猴桃根醋酸乙酯部位的化学成分进行了研究，从中分离得到3个化合物，通过理化性质及波谱分析，鉴定其结构分别为β－谷甾醇（Ⅰ），熊果酸（Ⅱ），胡萝卜苷（Ⅲ）。化合物Ⅱ为首次从该植物中分离得到。

1 器材。

XT4—100A显微熔点测定仪，温度计未校正； INOVA 500NB超导核磁共振谱仪；ZAB—HS双聚焦磁质谱仪；Agilent8453紫外—可见分光光度仪；NEXUS470型（FT—IR）傅立叶红外分光光度计。柱层析用硅胶（100～200目）、薄层层析用硅胶G（200～300目）由青岛海洋化工厂生产，Sephadex LH—20购于Pharmacia公司；试剂均为分析纯；β－谷甾醇对照品、熊果酸对照品和胡萝卜苷对照品均购于中国药品生物制品检定所；美味猕猴桃根2005—12采于广西桂林地区（资源县），经中国科学院广西植物研究所植物分类室鉴定为猕猴桃科猕猴桃属植物美味猕猴桃Actinidia deliciosa C.F.Liang et A.R.Ferguson；标本存于广西中医学院药物分析教研室。

2 方法与结果。

2.1 提取与分离 将新鲜的美味猕猴桃根晒干，粉碎为粗粉，称取40 kg药材粗粉，用70%乙醇回流提取3次，2 h/次。合并提取液，减压浓缩，得粗提物。用硅胶拌匀后，依次用石油醚（60～90 ℃）、醋酸乙酯、正丁醇、95 ％乙醇回流提取，回收溶剂，得石油醚部位24 g，醋酸乙酯部位132 g，正丁醇部位322 g，95 ％乙醇部位267 g。

取醋酸乙酯部位50 g，用硅胶柱色谱分离，石油醚—丙酮梯度洗脱，用磷钼酸乙醇溶液、碘蒸气、浓硫酸—香草醛显色检识。在（50∶1）的洗脱部分得到一白色结晶，经石油醚—丙酮反复重结晶得到白色针状结晶Ⅰ（200 mg）；在（30∶1）的洗脱部分得到一白色粗结晶，经氯仿—甲醇反复重结晶得到白色粉末状结晶Ⅱ（35 mg）；在（10∶1）的洗脱部分得到一白色结晶，经甲醇反复重结晶得到白色颗粒状结晶Ⅲ (160 mg)。

2.2 结构鉴定。

2.2.1 化合物Ⅰ 白色针晶（石油醚—丙酮），mp140～140.5 ℃。Liebermann—Burchard反应阳性，氯仿—浓硫酸反应阳性。IR(KBr)cm—1：3 404（OH）；2 963，2 934，2 869（C—H）；1 463，1 377（CH3）；1 667，801（—C=C—）。FAB——MS：m/z413 ［M—H］—，399［M—CH3］—，397［M—OH］—396［M—H2O］—, 381［M—H2O—CH3］—, 273［M—C10H21］—, 255［M—C10H21—H2O］—, 231［M—C10H21—C3H6］—, 213［M—C10H21—C3H6—H2O］—，样品分子量为414。13C—NMR（400 MHz，DMSO—d6）δppm：33.2(C—1)、31.0(C—2)、69.7(C—3)、41.9(C—4) 、141.0(C—5)、119.8(C—6)、31.1(C—7)、35.0(C—8)、49.4(C—9)、35.7(C—10)、20.2(C—11)、39.0(C—12)、41.5(C—13)、55.9(C—14)、27.2(C—15)、25.6(C—16)、55.3(C—17)、11.2(C—18)、18.2(C—19)、45.0(C—20)、11.3(C—21)、23.4(C—22)、36.6(C—23)、31.2(C—24)、28.6(C—25)、19.2(C—26)、19.2(C—27)、22.4(C—28)、18.6(C—29)。1H—NMR（500 MHz，DMSO—d6）δppm：0.6～2.2之间出现多重山峰似的甾体或三萜母核特征峰，是多个化学环境相似的—CH—、—CH2—和—CH3，信号相互重叠。5.27(1H，d,J=5.5 Hz,H—6),3.51(1H,m,H—3),0.69(3H,s,18—CH3),1.01(3H,s,19—CH3),0.91(3H,d.J=6.0Hz,21—CH3),0.87(3H,d.J=4.5 Hz,26—CH3),0.86(3H,d.J=4.5 Hz,27—CH3),0.89(3H,d.J=6.0 Hz,29—CH3)。根据以上数据分析，与对照品β—谷甾醇共薄层，两者的斑点颜色和Rf值均一致，混合熔点不降，故鉴定为β－谷甾醇。

2.2.2 化合物Ⅱ 白色粉末状结晶（氯仿—甲醇），mp：285～287℃，Liebermann—Burchard反应呈阳性，Molish反应呈阴性，提示可能为三萜类化合物。IR(KBr)cm—1：3 416（OH）；2 926，2 870（C—H）；1 696（C＝O）；1 455，1 377（CH2、CH3）。EI—MS：m/z456［M］ +，439［M—OH］+，438［M—H2O］+，411［M—COOH］+, 393,300,248(基峰),故样品分子量为456。结合碳谱数据分析，确定该化合物的分子式是C30H48O3。1H—NMR（500 MHz，C5D5N）δppm：5.48(1H，s，H—12)；3.85(1H，m，H—2)；3.45(1H，m，H—3α)；2.63(1H，d，J=11.3 Hz， H—18β)；0.87，0.93(各3H，d，J=5.9Hz，CH3—29，CH3—30)，0.94,0.98,1.00,1.01,1.04(各3H，s，5×CH3)。13C—NMR（400 MHz，C5D5N）δppm：39.0(C—1)、28.1(C—2)、78.1(C—3)、39.9(C—4)、55.8(C—5)、18.7(C—6)、33.5(C—7)、42.5(C—8)、48.0(C—9)、37.2(C—10)、23.6(C—11)、125.6(C—12)、139.2(C—13)、42.5(C—14)、28.6(C—15)、24.9(C—16)、48.0(C—17)、53.5(C—18)、39.4(C—19)、39.4(C—20)、31.0(C—21)、37.4(C—22)、28.8(C—23)、15.6(C—24)、16.6(C—25)、17.4(C—26)、23.9(C—27)、179.9(C—28)、17.5(C—29)、21.4(C—30)。根据以上数据分析，与对照品熊果酸共薄层，两者的斑点颜色和Rf值均一致，混合熔点不降，并且与文献［6］对照一致，故确定化合物Ⅱ为熊果酸（ursolic acid）。