左旋咪唑对急性EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4表达的影响
作者：邱伟文, 郑荣远; 韩钊, 卢晔芬, 吴赛珍, 章圣辉, 韩义香。
毕业论文。
【关键词】; 左旋咪唑;,实验变态反应性脑脊髓炎;,CD28;,CD4;,表达 毕业论文。
[摘 要]; 目的: 探讨左旋咪唑(Levamisole, LMS)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4表达的影响及其意义。方法: 采用流式细胞术检测EAE大鼠脊髓单个核细胞上CD28和CD4的表达水平。结果: LMS同时给药组和预处理的EAE组大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4的表达水平, 均明显高于非LMS处理的EAE模型组。结论: LMS能促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD28和CD4的表达, 这可能是LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病发病机制中的一个重要环节。 毕业论文。
[关键词]左旋咪唑; 实验变态反应性脑脊髓炎; CD28; CD4; 表达 ; 左旋咪唑(Levamisole, LMS)为四咪唑的左旋体。1969年, LMS作为广谱驱肠虫药开始使用于临床。1971年, Renoux发现LMS具有增强免疫的作用, 其作为免疫增强剂已被推广用于慢性感染、 皮肤疾病、 自身免疫性疾病及肿瘤等疾病的免疫调节辅助治疗。于1982年LMS开始在我国销售后, 临床使用相当广泛, 但发现其有许多严重的不良反应, 尤其是LMS引起脑炎综合征(或迟发性脑病, 急性脱髓鞘白质脑病)已陆续报道了600多例[1]。郑荣远等[2]完成了多项流行病学调查, 论证了咪唑类驱虫药与该类脑病的发生有因果关系, 发现LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病的发病率为45.8/10万[3], 但其诱发该病的确切机制仍不清楚。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)为CD4+T细胞介导的对髓鞘抗原的自身免疫性疾病, 是研究炎性脱髓鞘白质脑病的经典动物模型。我们首次观察到LMS能促进Wistar大鼠急性EAE脊髓内单个核细胞上CD28和CD4的表达, 提示这可能是其诱发炎性脱髓鞘白质脑病发病机制中的重要环节。 毕业论文。
1; 材料和方法。
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1.1; 材料; Wistar大鼠, 雌性, 6～8周龄, 体质量150～180 g, 由河北省实验动物中心提供。豚鼠（雌雄兼有）, 质量250～300 g, 由温州医学院实验动物中心提供。左旋咪唑购于Sigma公司。BCG、 百口咳疫苗购于卫生部上海生物制品研究所。Percoll淋巴细胞分离液购于美国Pharmacia公司。胰蛋白酶溶液购于杭州吉诺生物医药技术有限公司。FITC 标记的小鼠抗大鼠CD8 抗体、 APC标记的小鼠抗大鼠CD4 抗体、 PE标记的小鼠抗大鼠CD28 抗体以及3种相应荧光素标记的小鼠IgG1抗体, 均购自美国Caltag公司。流式细胞仪(FACSCalibur)为BD公司产品。
毕业论文。
1.2; 方法。
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1.2.1; 抗原的制备; 将豚鼠经腹腔注射100 g/L的水合氯醛麻醉后, 经主动脉灌注生理盐水至无血液流出时, 小心取出脊髓, 剥除脊膜, 加预冷的生理盐水制成50 %（W/V）的豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）。将GPSCH与等体积的完全弗氏佐剂（CFA）混匀制成稳定的油包水型乳剂备用。 毕业论文。
1.2.2; 实验分组; 将42只Wistar大鼠随机分为4组,对照组6只, 其余3组各12只。第1组(LMS同时给药组): 先经腹腔注射NS（10 mL/kg）, 2次/d, 共7 d, 再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂, 0.4 mL/只, 于第0、 24及48 h腹腔注射LMS (10 mg/kg)。第2组(LMS预处理组): 先经腹腔给Wistar大鼠注射LMS（10 mg/kg）, 2次/d, 共7 d, 再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂, 共0.4 mL/只, 于第0、 24及48 h腹腔注射同量NS。第3组（EAE模型组）: 先经腹腔注射NS 10 mg/kg, 2次/日, 共7 d, 再经四足垫皮下注射GPSCHCFA乳剂, 共0.4 mL/只, 于第0、 24及48 h经腹腔注射同量的NS。第4组（对照组）: 先经腹腔给Wistar大鼠注射同量的NS, 2次/d, 共7 d, 再经四足垫皮下注射CFA和NS制成的乳剂, 共0.4 mL/只, 于第0、 24及48 h腹腔注射同量的NS。4组动物均在免疫后的当日, 经右腹股沟皮下注射百口咳疫苗0.1 mL（约1×109菌体）。 毕业论文。
1.2.3; 动物行为改变的观察; 免疫后每日早晚各观察动物行为的改变1次, 并详细记录, 同时记录其体质量的变化, 于第25天全部处死。 毕业论文。
1.2.4; 大鼠神经功能受损情况观察; 根据Kono等[4]报道的标准, 定为0～5分: 无明显异常者为0分, 尾巴无力者为1分, 轻微后肢无力者为2分, 严重后肢麻痹者为3分, 四肢麻痹者为4分, 死亡者为5分。 毕业论文。
1.2.5; 大鼠脑、 脊髓的病理检查; 将Wistar大鼠以100 g/L水合氯醛腹腔注射麻醉后, 用300 mL预冷的GKN液(8 g/L NaCl、 04 g/L KCl、 356 g/L Na2HPO412H2O、 078 g/L NaH2PO42H2O、 2 g/L葡萄糖及2000 U/L肝素, pH74)经主动脉灌流至无血液流出时, 小心取出脊髓及脑组织。取一小段颈髓及部分脑组织依次经40 g/L多聚甲醛固定、 石蜡包埋及常规苏木素伊红染色(切片厚5 μm)和Luxol Fast Blue髓鞘染色(切片厚10 μm)后, 在光学显微镜下进行病理学检查。 毕业论文。