血清甲状腺激素(T3、T4)的磁酶联免疫测定法——方法学探讨及临床
【摘要】本技术为酶联免疫系统与磁性微粒分离技术相结合的一种测定血清T3、T4的方法，并使用了一种高亲合力的抗体。
血清中的T3、T4与一定量的荧光素T3、T4衍生物竞争性地和少量酶标T3、T4单克隆抗体相结合，并使用了ANS置换剂，把T3、T4从蛋白质中置换出来。
方法学检测数据如下：最小检出量T3为0.2ng／mL,T4为5.0ng／mL；回收率：T3为1.03，T4为0.98；批内变异系数T3为3.5％，T4为5.1％；批间变异系数T3为4.6％，T4为5.1％；两种抗血清对相应抗原的同类物的交叉反应率低，用本方法与放免法同时测定30份标本，同一激素的两种方法测定结果呈显著相关。
【关键词】甲状腺激素磁酶联免疫测定 近年来，经过科研工作者的努力，先后建立并发展了多种使用非放射性标记物的免疫测定法，其中包括磁分离酶联免疫测定法(MAIA)。
国内外关于人血清T3和T4的MAIA的论著已有多篇，我们于1995年来对本院多例病人和正常人进行了血清中的T3、T4测定，其中30份病人标本同时用放免法(RIA)作对照，兹将结果报告如下。
1材料和方法 1.1材料 本实验使用的是北京倍爱康生物技术有限公司提供的T3、T4试剂盒。
(1)抗T3、(T4)衍生物1瓶：牛碱性磷酸酶标鼠抗T3、(T4)单克隆抗体的Tris缓冲液；羊和牛的血清蛋白；叠氮化纳0.2％W/V，20mL。
(2)T3、(T4)、衍生物1瓶：荧光素标T3、(T4)、衍生物的Tris缓冲液；羊、牛血清蛋白；0.19％W/VANS：0.2％W/V叠氮化纳，20mL。
(3)分离剂(0.6％)1瓶：与磁性微粒共价结合的羊抗荧光素抗血清0.6％W/V的Tris缓冲液：0.5％W/V牛血清蛋白；0.2％W／V叠氮化钠，40mL。
(4)清洗浓缩液1瓶：表面活性剂和防腐剂的Tris缓冲液，14．3mL。
(5)基质2瓶：为单磷酸酚肽(PMP)，辅酶的缓冲液15．0mL。
(6)终止液1瓶：氢氧化钠与螯合物的缓冲液100mL，pH10。
(7)对照液1瓶：冻干人血清，0．01％W／V硫汞散复制后为1mL。
(8)标准液各6瓶：T3盒内含0，0.5，1.0，2.5，5.0，10．0ng/mL的T3人血清溶液；0.2％W／V叠氮化合物1mL；T4盒内含0，20，40，80，150，300ng／mL的T4人血清；0.2％W／V叠氮化合物，0.7mL。
1.2标本采集 取5．0mL静脉血至玻璃试管，不加添加剂，在室温中凝结，离心，取血清部分。
将T3、T4清洗液稀释至100mL，对照液加蒸馏水1mL稀释，测定时按表1顺序加液至12×60nm塑料试管中。
加液毕，37℃水温孵育15分钟，加入过量与磁性微粒结合的抗荧光素抗体，它快速、特异地结合成T3、T4单克隆抗体复合物，不用离心，就能在磁场中沉淀，洗涤2次，滤干，向试管内加入60mLPMP．37℃水温孵育15分钟，加入200mL终止液、显色，上架沉淀10分钟，在SEROZYME—I型内分泌定量测定仪上用492nm／550nm／630nm波长读取吸光度(OD)值。
2结果 (1)标准曲线，从零标准管的OD值减去空白管的OD值得A值，从各标准管的OD值减去空白管的OD值得B值，以(B／A)％为纵座标，各标准管的T3(T4)标准液浓度为横座标，即可绘出T3(T4)测定的标准曲线。
用本法做出的标准曲线T3的可测范围为0．3～10.0ng/mL，T4为6.0～300ng/mL。
(2)最小检测量(灵敏度)：根据实验的标准曲线计算，本方法测T3的最小检测量为0.2ng/mL，T4为5.0ng/mL。