高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用

【关键词】 盐酸二甲双胍 血药浓度 高效液相色谱法。

盐酸二甲双胍(metformin hydrochloride,Met)是临床常用的口服双胍类降糖药,近年有一些缓、控释制剂上市。为了探讨其体内过程与临床疗效,笔者参考有关文献并加以改进[14],在实验室建立高效液相色谱法测定Met血药浓度,报道如下。

1材料和方法。

1.1材料高效液相色谱系统(包括。

510泵,996二极管阵列检测器,7725i 进样器,Empower数据处理系统,美国Waters公司);电子天平(AE240,上海梅特勒托利多有限公司);旋涡混合器(XW80,上海医科大学仪器厂);石英亚沸高纯水蒸馏器(SYZ550,金坛市丹阳门石英玻璃厂);台式高速离心机(TGL16G,上海医用分析仪器厂)。

Met标准品(美国Sigma公司,批号113K0931);尿苷(Uri)对照品(上海化学试剂站分装厂,批号950906);IPRB8离子对色谱试剂(天津化学试剂二厂,批号20070510);甲醇(国药集团上海化学试剂有限公司,批号T20060930,色谱纯),实验用水为三蒸水。

1.2色谱条件NovaPak C18色谱柱(3.9 mm×150 mm,4 μm);流动相为甲醇∶0.03 mol/L磷酸盐缓冲液∶三乙胺(18∶982∶0.1,含2.0 mmol/L IPRB8离子对试剂,用氢氧化钾溶液调pH 6.2);流速0.9 mL/min;检测波长233 nm;柱温25 ℃;进样量20 μL。

1.3标准储备液配制(1)Met储备液:精密称定Met标准品33.03 mg,用三蒸水溶解并定容成10 mL,置4 ℃冰箱保存。(2)内标储备液:精密称定Uri 5.50 mg,用三蒸水溶解并定容成10 mL,置4 ℃冰箱保存。

1.4血浆样品处理取血浆样品1 mL,加入内标储备液50 μL并摇匀,加35%硫酸锌溶液50 μL及氯仿0.5 mL,涡旋振荡3 min,4000 r/min离心5 min,取上清液分析。

1.5标准曲线的制备精密吸取Met储备液加空白血浆适量,稀释成浓度分别为50,100,250,500,2 000,4 000 ng/mL的系列模拟含药血浆样品,按1.4方法处理。

2结果。

2.1色谱行为本实验色谱条件下,分离度R=4.85,理论塔板数以二甲双胍计算n=1685,待测物色谱行为见图1。

2.2标准曲线将1.5分析结果以Met峰面积与内标峰面积之比(y)对浓度(x)进行回归分析,得回归方程y＝0.0540x+0.1773(r＝0.9997,n=6)。

2.3回收率试验精密吸取Met储备液加空白血浆,配成浓度分别为50,500,4 000 ng/mL的模拟血浆样品各5份,按1.4方法操作分析,考察方法回收率(表1)。

2.4精密度试验同回收率测定方法,配制50,500,4 000 ng/mL的血浆样品,按1.4方法操作分析,一日内不同时间5次,连续操作5日测定,考察方法精密度(表1)。表1Met回收率及精密度试验结果n＝5.Met:盐酸二甲双胍.表内数据为%.