槲皮素等二十八种中药成分对八种口腔致病菌抑制作用的筛选实验
作者：王小平，甄蕾，周曾同，李鸣宇，张卫东。
【摘要】 目的 测试28种中药有效成分抑制8种口腔常见致病菌的作用，为抗菌中药有效成分用于口腔感染性疾病的防治做一些探讨。方法 选择28种有抗菌作用的中药的有效成分，采用噻唑蓝法对8种口腔常见致病菌作药物敏感实验，同时采用液体棋盘稀释法进行联合药敏实验。结果 28种中药有效成分对3种牙周细菌抑制作用不明显，对另5种口腔常见细菌有一定的抑制作用，其中松萝酸和槲皮素有较强的抑菌作用，MIC值分别在0.0156～0.0625mg/ml和0.3125～0.125mg/ml之间。 结论 所选28种中药成份中，松萝酸和槲皮素具有较强的抑菌作用。
The effects of the compositions of 28 Chinese herbs on the 8 bacteria in oral cavity。
【Abstract】 Objective In order to exploit the natural resources of Chinese herbs， the inhibitive effects of the compositions of 28 Chinese herbs on the growth of 8 common bacteria in oral cavity were determined. Methods Sensitive test of these bacteria were carried out by MTT method. At the same time， chessboard dilution method was used for combined sensitive test. Results The compositions of 28 Chinese herbs can inhibit the growth of 5 bacteria in different levels， but the effects on other 3 bacteria are not obvious. Quercetin and usnic acid have better effects on 5 bacteria than other 26 herbs compositions， with MIC 0.03125～0.125mg/ml and 0.0156～0.0625mg/ml. Conclusion Quercetin and usnic acid can inhibit the 5 bacteria growth more effectively than other 26 herbs compositions.
【Key words】 compositions Chinese herbs bacteria oral cavity quercetin usnic acid。
细菌感染性疾病为一类常见病，自青霉素问世以来，抗生素成为治疗此类疾病的首选及常用药物。但随着抗生素在临床的长期广泛应用，各种耐药菌株相继产生，已经引起医务工作者的高度重视并从多方寻求克服致病细菌产生耐药菌株和开发新抗生素的途径。
我国传统中医药学源远流长，在其上千年的发展历史中，发现了一系列针对细菌感染有确切疗效的药物。近年来，中药提取物的抑菌作用研究较多，这也是开发利用中药资源的一个重要组成部分。本实验通过28种中药有效成分对8种口腔常见致病菌的抑制作用比较，为抗菌中药有效成分用于口腔感染性疾病的防治做一些探讨。
1 材料与方法。
1.1 材料。
1.1.1 药品 柚皮苷、柚皮素、辛弗林、水杨苷、芹菜素、淫羊藿苷、莽草酸、染料木素、染料木苷、刺芒柄花素、氧化苦参碱、甘草酸、甘草次酸、白藜芦醇、漆黄素、积雪草苷、松萝酸、青藤碱、芦丁、穿心莲内酯、苦豆碱、苦参碱、葛根素、黄芩苷、甘草酸二铵、白芍总苷、槲皮素、原儿茶酸，均为上海第二军医大学天然药化教研室提供，药物原液均为1mg/ml。
1.1.2 试剂 Tryptone（Oxoid生产）、Polypepton（日本制药株式会社制造）、Agar（Japan分装）、噻唑蓝（Thiazolyl Blue，MTT，Bebco分装）。
1.1.3 实验用细菌 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型溶血性链球菌、伴放线放线杆菌、牙龈朴啉单胞菌、具核梭杆菌、变形链球菌。以上细菌均为国际标准菌株，由上海市第九人民医院微生物实验室提供。
1.2 方法。
1.2.1 细菌培养及菌悬液配制 国际标准菌株复苏，染色鉴定后接种于相应琼脂平板，适宜条件下培养。挑取琼脂表面生长良好的单个菌落，混悬于相应液体培养基培养24～48h，麦氏比浊并稀释至105CFU/ml备用。
1.2.2 中药成分抑菌作用筛选实验 用无菌微量加样器取上述药物原液50μl分别加入无菌96孔微孔板中，倍比稀释，再加入50μl菌液，混匀，适宜条件下培养，于培养结束前4h各孔分别加入1mg/ml的噻唑蓝（MTT）溶液20μl，继续培养4h。肉眼观察无蓝色颗粒生成的最低药物浓度即为该药的最低抑菌浓度（MIC）。同时设阳性对照组、阴性对照组、溶剂对照组。
1.2.3 松萝酸与槲皮素的联合抑菌实验 采用液体棋盘稀释法，以部分抑菌浓度指数（fractional inhibitory concentration index，FIC）作为联合药敏实验结果的判断依据。FIC＜0.5表示两药有协同作用， FIC在0.5～1.0表明两药有相加作用， FIC在1.0～2.0表明两药是无关作用， FI＞2.0表明两药有拮抗作用［1］。
2 结果。
Table 1 The minimal inhibitory concentration of 28 Chinese herbs compositions on 8 bacteria in oral cavity。
注： 1、unit: mg/ml，2、本实验中 0.25 mg/ml认为无抑菌作用。
整体分析可知，本实验所选28种中药成分对3种牙周细菌抑制作用不明显，除漆黄素和青藤碱对伴放线放线杆菌、具核梭杆菌稍有抑制作用以外，其它中药对3种牙周细菌均无抑制作用。松萝酸和槲皮素对其余5种口腔常见细菌有较强的抑制作用。