超微量酶法检测血清总胆固醇的实验探讨
作者：吴斌张春妮王志军黄易张军韩建鹏。
【摘要】 目的 用超微量血清在微孔板内进行酶法检测总胆固醇（TC），分析其线性范围、准确度、精密度、回收率，并与日立7600型全自动生化分析仪进行测定比较，以探讨超微量酶法检测总胆固醇结果的可靠性。方法 采用超微量酶法，酶标生化多功能分析仪比色测定。结果 本法的线性范围达15.1mmol/L，批内变异系数（CV）为1.29%～2.45%，日间变异系数（CV）为1.95%～2.67%，回收率为99%～105%，平均102.8%，与全自动生化分析仪比较具有良好的相关性，y=1.112x—0.339，r=0.9839。结论 本法操作简单，血清、试剂用量少，检测快速，准确性及重复性好，结果可靠，利于微量检测血清总胆固醇的推广应用。
【Abstract】 Objective To evaluate the reliability of super—micro—quantityzymed method for determining the levels of serum total cholesterol.Methods Super—micro—zymed method was adopted，zyme—labelled biochemiˉcal multifunctional analyzer was used for colorimetric analysis.Results The linear scope was15.1mmol/L，inside CV1.29%～2.45%，daytime CV1.95%～2.67%，recovery rate99%～105%，mean102.8%.Itwas well correlations with the results from antomatic biochemistry analyzer，y=1.112x—0.339，r=0.9839.Conclusion The methods would be useful to determine the levels of serum total cholesterol.
Key words super—microserum zymed method total cholesterol。
酶法检测血清总胆固醇是目前公认为最适于作血清总胆固醇测定的常规方法 ［1］ ，在各大中小医院实验室测定TC大多采用酶法，既可于作终点法手工操作，分光光度计比色测定，也可于半自动、全自动生化分析仪检测。它具有试剂单一、试验稳定、使用方便等优点。但手工法、分光光度计比色和半自动生化分析仪试剂消耗量大，成本高。我们采用超微量血清酶终点比色法，应用酶标生化多功能分析仪对TC进行了实验探讨，使试剂用量明显低于上述仪器的测试方法，且测得结果准确可靠，重复性好。现报告如下。
1 材料与方法。
1.1 仪器 酶标生化多功能分析仪（中国航天北京市新风机电技术公司生产）;日立7600型全自动生化分析仪（日本日立公司生产）;2μl超微量定量移液器（军工科技信息咨询服务部生产）;50～250μl可调移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司生产）;96孔酶标板（华美生物工程公司生产）。
1.2 试剂 酶标生化多功能分析仪应用试剂:总胆固醇（浙江东瓯生物工程有限公司生产）;日立7600型全自动生化分析仪应用试剂:总胆固醇（RANDOX英国）。
1.3 样品 常规检验血标本。
1.4 方法 总胆固醇COD—PAP ［2］ 法。取96孔酶标板一块，用2μl超微定量移液器于测定孔内加待检血清2μl，标准孔内加标准液2μl，空白孔内加蒸馏水2μl（可加可不加，不影响测定结果），各孔加酶应用液200μl，混匀，置37℃10min后，置酶标生化多功能分析仪测量室内，波长505nm/ 650nm，测量各孔总胆固醇含量。
2 结果。
2.1 两机对比试验 用门诊常规检验的血标本20例分别于日立7600型全自动生化分析仪及酶标生化多功能分析仪检测。结果分别为日立7600型全自动生化分析仪的TC平均值4.80mmol/L，酶标生化多功能分析仪的TC平均值4.62mmol/L，回归及相关系数，TC a=1.112，b=—0.339，r=0.9839。
2.2 线性分析 取一份外观正常高值TC15.1mmol/L标本，用生理盐水作梯度稀释，使理论值含TC分别为15.1、7.55、3.78、1.89、0.94mmol/L。按上法操作，每一浓度平行3孔，取平均值。其理论值与实验值直线回归方程和相关系数见表1。
表1 线性实验略。
2.3 精密度实验 用常规检测标本高、中、低值各1份，批内重复测定20次，批间重复每日测定4次，共5天，结果见表2。
表2 重复性实验略。
2.4 准确性实验 取宝灵曼公司定值质控血清，批号156448，TC3.98mmol/L;北京中生生物工程高技术公司定值质控血清，批号020414，TC3.88mmol/L。用上述试剂该酶标生化多功能分析仪，每一浓度平行3孔，取平均值。宝灵曼公司，其测定值为:TC3.93mmol/L，北京中生生物工程高技术公司，其测定值为:TC3.87mmol/L。
2.5 回收试验 取一份定值质控物TC=3.98mmol/L，分别加入2.59、5.18、7.77、10.36mmol/L不同浓度标准液。其回收率分别为104%、103%、99%、105%，平均102.8%。