头孢他啶诱导大肠埃希菌内毒素释放及常用中药注射剂抗内毒素作用
作者：司文秀 赵华 张征 杨继章，王业。
【摘要】 目的 探讨头孢他啶对不同浓度大肠埃希菌内毒素释放的影响及常用清热解毒中药注射剂体外抗内毒素活性。方法 采用二倍稀释法测定头孢他啶对大肠埃希菌的MIC，并确定清开灵、双黄连和喜炎平注射剂临床常用剂量对MIC的影响；50×MIC头孢他啶对处于对数生长期不同浓度大肠埃希菌内毒素产生的影响；清开灵、双黄连和喜炎平注射剂与头孢他啶联合应用时抗内毒素作用的研究。结果 头孢他啶对大肠埃希菌的MIC为0.125μg/ml，清开灵、喜炎平注射剂对头孢他啶的MIC无影响，双黄连注射剂可显著提高头孢他啶MIC；头孢他啶于高菌液浓度时可诱导内毒素释放，在低菌液浓度时抑制内毒素释放；中药注射剂与头孢他啶联合应用时，加药顺序对内毒素的产生有一定影响，当清开灵、喜炎平注射剂在头孢他啶之后应用时，可显著降低内毒素含量，喜炎平的效果优于清开灵注射液。结论 头孢他啶对大肠埃希菌内毒素释放的影响与菌液浓度有关。清开灵、喜炎平注射剂具有抗内毒素作用，与头孢他啶联用时，用药顺序对内毒素的消除有一定影响。
【关键词】 中药注射剂； 头孢他啶； 内毒素； 大肠埃希菌。
ABSTRACT Objective To study the factors that influence the endotoxin release induced by ceftazidime in different Escherichia coli concentrations, and to explore the antiendotoxin effects of 3 kinds of Chinese medicine injections, namely Qingkailing injection, Shuanghuanglian injection and Xiyanping injection in vitro. Methods Twofold dilution to determine the MIC of ceftazidime, and determine if the MIC could be altered by 3 kinds of injections when used in routine dosages; to study if ceftazidime (at 50×MIC) could affect the production of endotoxin while added to different concentrations of Escherichia coli which in logarithm phase; to determine the antiendotoxin activity of the three injections when used concomitantly with ceftazidime. ResultsThe MIC of ceftazidime was 0.125 μg/ml, Qingkailing injection and Xiyanping injection had no effect on it, but Shuanghuanglian injection could lead it to increased; at high Escherichia coli concentrations (2.5×104～2.5×105 CFU/ml), ceftazidime induced a great deal of endotoxin release, but at low concentrations (2.5×10～2.5×103 CFU/ml), ceftazidime inhibited endotoxin release; the using sequence of Chinese medicine injections and ceftazidime could affect endotoxin release. When Qingkailing injection and Xiyanping injection used after giving ceftazidime, they showed antiendotoxin effect, and Xiyanping injection was the better. Conclusion The endotoxin releasing activities of ceftazidime were not only related to the bacterial concentrations but also influenced by the sequence usage of Qinakailing or Xiyanpang injections.
KEY WORDS Chinese medicine injections; Ceftazidime; Endotoxin; Escherichia coli。
内毒素是众多细胞因子诱导剂，可触发炎症级联反应，其成分为革兰阴性菌细胞壁外膜的脂多糖成分。有人认为［1］，革兰阴性细菌所致的脓毒血症至今死亡率居高不下，是由于抗菌药物在杀灭细菌的同时伴随着内毒素的释放，产生高内毒素血症所致。我们据此设计实验，探讨头孢他啶在临床用量下对细菌内毒素产生的影响。寻找有效、低毒的抗内毒素药物一直是多年来的研究热点，据文献报道［2，3］，具有清热解毒作用的中药及其注射剂有抗内毒素作用，本文模拟临床用药剂量、顺序及间隔时间，体外实验考察了我院常用清热解毒中药注射剂清开灵、双黄连和喜炎平分别与头孢他啶联合应用时对大肠埃希菌产生内毒素的影响，旨为临床内毒素血症的治疗提供参考。
1 材料与方法。
1.1 材料。
(1)菌种 大肠埃希菌ATCC25922，由河北医科大学第一医院检验科提供。
(2)培养基 改良型RPMI 1640(海克隆生物化学制品有限公司，批号NSG0059)。
(3)试剂 头孢他啶(每支0.5g，石药集团中诺药业有限公司，批号07043001)；清开灵注射液(每支10ml，河北神威药业有限公司，批号07032622)；双黄连粉针剂(每支600mg，哈药集团中药二厂，批号0611235)；喜炎平注射液(每支50mg，江西青峰药业有限公司，批号0080313)；细菌内毒素工作标准品(每支140Eu，中国药品生物制品检定所，批号150601200758)；内毒素测定试剂盒(湛江安度斯生物公司，批号0609271)。
(4)仪器 B600A型低速离心机(白洋离心机厂)；BET32B细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂)。
1.2 方法［4］。
(1)菌液配制 细菌接种于无抗生素的RPMI 1640培养液中，于37℃水浴中培养16h，作为细菌母液。
(2)头孢他啶MIC的测定 采用2倍稀释法于96孔板中测定头孢他啶在空白液、清开灵(500倍稀释液)、双黄连(0.36mg/ml)及喜炎平(0.01mg/ml)中对大肠埃希菌的MIC。终菌量为5×106CFU/ml左右，37℃保温箱培养20h。
(3)头孢他啶对大肠埃希菌内毒素含量测定 细菌母液临用前配成约1×108CFU/ml，再分别以RPMI1640培养液稀释成所需浓度备用。取5ml离心管若干，各加入2ml RPMI 1640培养液，37℃水浴预热10min，加入备用菌液50μl，使菌浓度分别为2.5×105、2.5×104、2.5×103、2.5×102及2.5×10CFU/ml，水浴培养3.5h，使细菌处于对数生长期。每个浓度的菌液组各设2组(对照组和头孢他啶组)，各加入RPMI 1640培养液或头孢他啶液100μl，使头孢他啶终浓度为50×MIC(6.25μg/ml)。继续水浴培养3.5h，离心取上清液，—20℃保存备用。按试剂盒说明方法测定RPMI 1640培养液内毒素基底值及各组内毒素含量。