生长激素释放肽ghrelin对小鼠结肠动力的影响
作者：邱文才 王维刚 闫钧 王志刚 郑起。
【摘要】 目的 探讨生长激素促分泌素受体（growth hormone secretagogue receptor，GHSR）内源性激动剂生长激素释放肽ghrelin对小鼠结肠动力的影响。方法 小鼠按随机数字法分组后，分别注射生理盐水和不同剂量ghrelin（20，50，100，200 ng/g），用炭末推进实验的方法观察ghrelin对小鼠结肠推进的影响，研究阿托品、NG—硝基精氨酸甲酯和D—Lys3—GHRP—6（GHSR阻断剂）对ghrelin（100 ng/g）引起的小鼠结肠推进改变的影响。将小鼠近端结肠环形平滑肌条安置在恒温灌流肌槽中并用SMUP—E生物信号处理系统记录肌条的自发收缩活动，观察不同浓度的ghrelin（0.01、0.1、1和10 μmol/L）对肌条自发收缩幅度的影响。结果 ghrelin能显著提高小鼠的结肠推进速度，有明显的量效关系。阿托品、NG—硝基精氨酸甲酯、D—lys3—GHRP—6均能显著抑制ghrelin促进结肠推进的作用（t=10.230，12.560，11.590，P＜0.05）。ghrelin能显著增加小鼠近端结肠环形平滑肌的自发收缩幅度，河豚毒素预处理肌条后ghrelin不能显著增加肌条的自发收缩幅度。结论 ghrelin可以显著增加小鼠结肠的推进，可能是通过结肠肌间神经丛的硝基能神经和胆碱能神经上的GHSR而起作用。
【关键词】 ghrelin； 生长激素促分泌素受体； 结肠动力。
【Abstract】 Objective To investigate the effects of ghrelin on colonic motility in mice. Methods The effects of ghrelin on colonic propulsive movement were detected by charcoal suspension pushing test after injection of normal saline and different doses of ghrelin （20, 50, 100, 200 ng/g）. The effects of atropine, NG—nitro—L—arginine methylester hydrochloride （L—NAME） or D—Lys3—GHRP—6 on the changes of colonic propulsive movement caused by ghrelin（100 ng/g） were also investigated. In vitro, the effects of different doses of ghrelin （0.01, 0.1, 1, 10 μmol/L） on the spontaneous contraction amplitude of proximal colonic circular muscle strips were studied. Results Ghrelin significantly accelerated the colonic propulsive movement in dose—dependent manner, but the effect was significantly inhibited in the presence of atropine, L—NAME or D—Lys3—GHRP—6 （t=10.230, 12.560, 11.590, P0.05）. Administration of ghrelin significantly increased the contraction amplitude of colonic circular muscle strips, but this effect was inhibited when the colonic circular muscle strips were pretreated by tetrodotoxin. ConclusionsGhrelin can accelerate colonic propulsive movement by activating growth hormone secretagogue receptor of cholinergic excitatory pathways and nitrergic nervous pathways in the enteric nervous system of colon.
【Key words】 Ghrelin; Growth hormone secretagogue receptor; Colonic propulsive movement。
生长激素释放肽ghrelin是1999年Kojima等发现的第一个生长激素促分泌素受体（growth hormone secretagogue receptor，GHSR）的内源性配体。ghrelin与GHSR结合后除了可以促进生长激素的释放外，还具有调节胃肠运动、心血管功能、能量代谢平衡、肿瘤细胞的增生和免疫系统功能等多种作用。我们研究给予小鼠不同剂量ghrelin后结肠推进的变化，并观察不同浓度ghrelin对小鼠近端结肠离体环形平滑肌条自发收缩活动的影响，从而探讨ghrelin对小鼠结肠动力的作用。
1 材料与方法。
1.1 实验动物和材料。
实验用C57小鼠，雌雄不限，体质量（25±5）g，购自上海中国科学院实验动物中心。ghrelin、硝基能神经阻断剂NG—硝基精氨酸甲酯（Ng—nitro—L—arginine methylester，L—NAME）和GHSR阻断剂D—Lys3—GHRP—6购自美国Tocris公司；胆碱能神经阻断剂阿托品、钠离子通道阻断剂河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）购自美国Sigma公司。小鼠结肠推进试验及离体肌条试验均在上海交通大学医学院生理学教研室完成。
1.2 实验方法。
1.2.1 动物分组和药物注射：48只小鼠禁食、自由饮水24 h后， 按随机数字法分为8组， 每组6只。向各组小鼠腹腔内注射生理盐水，ghrelin 20、50、100、200 ng/g，ghrelin 100 ng/g+阿托品1 μg/g、ghrelin 100 ng/g+L—NAME 50 μg/g、ghrelin 100 ng/g+D—Lys3—GHRP—65nmol/g。后3组的阿托品、L—NAME和D—Lys3—GHRP—6均在注射ghrelin100ng/g前20 min注射。
1.2.2 小鼠结肠推进：结肠推进实验根据文献［1］进行制备，在紧靠回盲部的近端结肠内注入100 g/L活性炭悬液0.2 ml。1 h后小鼠颈椎脱臼法处死，立刻取出全部结肠，测量结肠中炭末推进距离及结肠全长，结肠推进率=（炭末推进距离/结肠全长）×100%。
1.2.3 小鼠近端结肠环形平滑肌条自发收缩活动：将小鼠断颈处死，平铺于实验台上，沿腹中线开腹取出近端结肠，放入台氏缓冲液中清洗后，移入氧饱和的台氏缓冲液中，在显微解剖镜下仔细去除黏膜层，显露肌层，沿环行肌走向剪取2.0 mm×8.0 mm的肌条，置于含有95% O2和5% CO2饱和台氏液的垂直灌流槽内，灌流槽内的液体通过恒温装置使温度保持在（37.0±0.5）℃。肌条一端固定于玻璃小钩上，另一端与SMUP—E生物信号处理系统连接的张力换能器相连，记录肌条自发收缩活动。肌条自发收缩活动平稳后灌流槽内分别通入不同浓度的ghrelin（0.01，0.1，1和10 μmol/L）。TTX阻断神经效应实验是灌流肌槽内预先通入TTX孵育后再同时通入TTX和ghrelin，观察神经效应被阻断时ghrelin对肌条自发收缩活动影响有无变化。更换药物浓度或药物种类时，用台氏液充分冲洗，待肌条自发收缩活动平稳后，再加入下一组浓度或下一种药物。