炙甘草汤对气血两虚证心律失常大鼠血清炎症因子和心肌酶的影响

作者：陈兰英，罗雄，罗颖颖，胡瑞刚，龚琴，陈筱，陈奇。

【摘要】 目的研究炙甘草汤对气血两虚证心律失常大鼠的保护作用。方法在放血和环磷酰胺并用致使大鼠气血两虚的基础上舌下静脉注射适量乌头碱，复制大鼠气血两虚证心律失常模型，并用炙甘草汤进行防治，观察炙甘草汤对模型大鼠心电图，血清心肌酶及血清炎症因子超敏C反应蛋白(hs—CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF—α)、白介素—2(IL—2)、白介素—6(IL—6)水平的影响。 结果炙甘草汤能明显改善模型大鼠心电图、延长心律失常的潜伏期及缩短心律失常的维持期;明显升高模型大鼠的hs—CRP、TNF—α、IL—2以及IL—6水平，显著降低心肌酶CK和LDH的水平。结论炙甘草汤对气血两虚证心律失常大鼠的保护作用可能与改善介导心肌细胞的炎症反应及心肌酶的活性有关。

【关键词】 炙甘草汤; 心律失常; 气血两虚; 血清炎症因子; 心肌酶。

Abstract：ObjectiveTo study the protective action of Zhigancao Decoction on arrhythmia with deficiency of both "Qi" and blood in rats.MethodsOn the basis of syndrome of both "Qi" deficiency and blood deficiency in rats induced by bloodletting and cyclophosphamide, arrhythmia was induced by aconitine, and Zhigancao Decoction was used to prevent and treat arrhythmia rats with syndrome of deficiency of both "Qi" and blood.The changes of ECG were observed, and activities of hs—CRP、TNF—a、IL—2,IL—6 ,CK and LDH were determined. Results Zhigancao Decoction could improve the ECG, increase arrhythmia latency and decrease arrhythmia duration significantly. At the same time, Zhigancao Decoction could obviously improve the levels of hs—CRP, TNF—α, IL—2 and IL—6 in model rats, and markedly reduce the levels of CK and LDH in model rats. ConclusionThe protective action of Zhigancao Decoction on arrhythmia with deficiency of both "Qi" and Blood in rats may be related to the improvement of the medicator released by inflammatory response and the enzyme of myocardium.

Key words：Zhigancao Decoction; Arrhythmia; Deficiency of both "Qi" and blood; Inflammatory factor; Myocardial enzyme。

炙甘草汤出自东汉张仲景的《伤寒论·辨太阳病脉证并治》篇第177条，“伤寒，脉结代，心动悸，炙甘草汤主之”，是中医治疗心悸胸痛的经典名方。在中医临床上，很多心律失常患者也往往伴有气血亏虚的症状，即气血两虚心律失常，炙甘草汤治疗气血两虚心律失常是在补益气血的基础上发挥复脉效果。为进一步探讨炙甘草汤的作用机理，采用贴近中医症候的病证结合模型复制大鼠气血两虚证心律失常模型，观察炙甘草汤对气血两虚证心律失常大鼠血清hs—CRP、TNF—α、IL—2、IL—6水平以及心肌酶的影响，从而分析该方对气血两虚心律失常的保护作用。

1 材料与仪器。

1.1 药物炙甘草汤原药材购于江西中医学院附属医院中药房，经江西中医学院中药鉴定教研室鉴定均符合2005版《中国药典》标准，将购得的炙甘草汤原药材加入适量的冷蒸馏水浸泡30 min，然后用武火加热，待沸腾后再用文火煎煮1 h，重复3次，合并3次水煎液，加入阿胶烊化，过滤，浓缩至含生药 2.4g/ml，4℃储藏备用，实验时再配成所需浓度给药。

1.2 动物SPF级SD大鼠110只，雄性，体质量(200±20)g，由上海西普尔—必凯实验动物有限公司提供，动物质量合格证号为SCXK(沪)2008—0016。

1.3 试剂hs—CRP酶联免疫分析试剂盒(UCL公司，产品编号：E0821r)、TNF—α酶联免疫分析试剂盒(UCL公司，产品编号：E0133r)、IL—2酶联免疫分析试剂盒(UCL公司，产品编号：E0073r)、IL—6酶联免疫分析试剂盒(UCL公司，产品编号：E0079r)、环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)、乌头碱(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心中药对照品研究室提供)、乌拉坦、戊巴比妥钠、乙醚 。

1.4 仪器 Swelab血球仪、Powerlab电生理记录仪、Sysmex全自动生化分析仪、Thermo酶标仪。

2 方法。

2.1 分组所有SD大鼠适应性喂养1周后，戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉[1], 用Powerlab电生理记录仪采集心电图，筛选出心电图正常的大鼠。将心电图正常的75只大鼠随机分为正常组，乌头碱组，气血两虚+乌头碱组，炙甘草汤高剂量组以及炙甘草汤低剂量组，每组15只大鼠。

2.2 造模及给药气血两虚+乌头碱组的大鼠，在实验的第1天至第9天每隔1天眼眶后静脉放血5.6 ml/kg[2～4]，在实验的第2天至第8天每隔1天腹腔注射0.4%环磷酰胺(20 mg/kg)[4]生理盐水溶液，首剂加倍，为40 mg/kg;于实验第9天用20%的乌拉坦(1.2 g/kg)麻醉后大鼠舌下静脉注射0.002%乌头碱(10 μg/kg)[5]的生理盐水溶液诱导心律失常，观察心律失常的潜伏时间和维持时间。正常组和乌头碱组的大鼠灌胃相同体积的生理盐水，乌头碱组在实验的第9天舌下静脉注射乌头碱诱导心律失常。炙甘草汤高剂量组和低剂量组大鼠的造模方法和观察指标同气血两虚+乌头碱组，并从实验第1天开始每天灌胃炙甘草汤药材的水煎液，连续9 d,高剂量为24 g(生药)/kg(体质量)，低剂量为12 g(生药)/kg(体质量)。实验结束后，所有组的大鼠股动脉取血，3 600 r/min离心15 min后得到血清，检测炎症因子和生化指标。

2.3 观察指标及检测方法肉眼观察大鼠外在体征变化;用powerlab电生理仪的心电通道检测大鼠心律失常的潜伏时间、维持时间;全自动生化分析仪测定血清心肌酶CK和LDH的水平;双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中炎症因子hs—CRP、TNF—α、IL—2以及IL—6水平，具体操作严格按照试剂盒说明书的要求进行。

2.4 统计学方法应用SPSS11.5 for windows统计软件进行数据分析，计量资料组间比较采用One—Way ANOVA。

3 结果。

3.1 外部体征变化情况气血两虚+乌头碱组大鼠造模后出现摄食明显减少、倦怠、懒动、毛发疏散不洁或竖毛，这与临床上气血两虚心律失常的症状较相似，而用炙甘草汤防治后，上述症状表现有显著的改善。

3.2 心律失常的变化情况从表1可知，用乌头碱诱导心律失常后，与正常组比较，气血两虚+乌头碱组大鼠的心律失常潜伏时间显著缩短、维持时间明显延长。炙甘草汤高剂量组和炙甘草汤低剂量组在造模的同时给予炙甘草汤后，心律失常的潜伏时间较模型组明显延长、维持时间较模型组显著缩短。图1～5是大鼠不同组别的心电图，显示心律失常的发生时间不同(见箭头所示)表1 炙甘草汤对气血两虚心律失常的影响。

3.3 炎症因子检测结果 结果见表2表2 炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠炎症因子的影响。

3.4 CK和LDH的检测结果结果见表3。炙甘草汤能明显降低气血两虚心律失常大鼠心肌酶CK和LDH的水平。

4 讨论。

本实验在中医基础理论指导下，采用复合的造模方法复制气血两虚证心律失常模型[6]，其大鼠表现的一系列症状与中医气血两虚证如精神萎靡、全身疲乏气短、四肢无力等有很多相似之处。而应用炙甘草汤的大鼠，其气血两虚的症状和心律失常指标较造模组有明显改善，可使大鼠体重增加，饮食增多，活动如常，心律失常潜伏时间明显延长、维持时间显著缩短，表明炙甘草汤对气血两虚心律失常有明显的保护作用。

炙甘草汤在临床治疗“脉结代，心动悸”时补益气血是治疗的首要步骤[7]，中医的气血亏虚与免疫力低下有很多相似之处，故炙甘草汤抗心律失常作用可能与机体的免疫功能密切相关。 C反应蛋白(CRP) 是一种急性时相反应蛋白，主要由肝细胞合成和分泌，是炎症过程敏感的指标，C反应蛋白水平的高低与免疫功能强弱有关。本实验中模型组大鼠造模后的hs—CRP显著降低，给予炙甘草汤后，hs—CRP水平升高很明显，这表明炙甘草汤抗气血两虚心律失常的发生与其免疫功能调节作用密切相关。

表3 炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠心肌酶的影响另外，气血两虚心律失常大鼠用炙甘草汤防治后，血清中心肌酶CK和LDH的含量明显下降，而心肌酶CK和LDH的含量的异常升高预示着心肌细胞的损伤和坏死，故炙甘草汤抗气血两虚心律失常作用与修复受损心肌细胞存在关联，具有保护心肌细胞的作用。

炙甘草汤可能通过增强机体免疫功能和介导心肌细胞的炎症反应，达到保护心脏作用，从而发挥抗大鼠气血两虚证心律失常作用，其机制有待进一步探讨。

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