白念珠菌生物膜对卡泊芬净的敏感性研究
作者：张洁 张莉 白秦玉 陈光仍。
【摘要】 目的 探讨新生白念珠菌生物膜对卡泊芬净的敏感性。方法 建立白念珠菌生物膜模型，采用标准化念珠菌生物膜抗真菌药物敏感实验法测定白念珠菌生物膜对卡泊芬净和两性霉素B的敏感性。结果 30株白念珠菌生物膜中，6株对两性霉素B敏感（SMIC80≤1μg／ml），24株对两性霉素B耐药（SMIC80＞1μg／ml）；28株对卡泊芬净敏感（SMIC80＜ 16μg／ml），2株对卡泊芬净耐药(SMIC80≥16μg／ml)。经统计学分析，就白念珠菌生物膜的对抗真菌药物的敏感性而言，卡泊芬净和两性霉素B之间有统计学意义（χ2=32.86,P0.05）。结论 白念珠菌生物膜对两性霉素B耐药明显，而对卡泊芬净敏感。 张洁（1980～），女，汉族，山西籍，青海大学医学院2005级研究生。
STUDY ON THE SUSCEPTIBILITY OF CASPOFUNGIN。
AGAINST BIOFILMS OF CANDIDA ALBICANS。
Zhang Jie1 , Zhang Li2,Bai Qinyu2, et al.
(1.Department of Medicine college in Qinghai University；。
2. Department of Dermatology, the Affiliated Hospital of Qinghai University )。
Abstract Objective To study the sensitivity of new Candida albicans biofilms to caspofungin. Methods Candida albicans biofilms model was established and evaluated sensitivity of Candida albicans biofilms to amphotericine B and caspofungin by Standardized Method．Results Among of thirty Candida albicans biofilms strains,, six were sensitive to amphotericine B（SMIC80≤1μg／ml）, twenty—four were resistant to amphotericine B（SMIC80＞1μg／ml）.twenty—eight were sensitive to caspofungin（SMIC80＜ 16μg／ml）; two were resistant to caspofungin (SMIC80≥16μg／ml). After statistical analysis, there was significant difference between caspofungin and amphotericine B （χ2=32.86,P0.05）. Conclusion Candida albicans biofilms are obviously resistant to amphotericine B and relatively sensitive to caspofungin.
Key words Candida albicans Biofilms Caspofungin Amphotericine B。
生物膜（biofilm）是指附着于无活力或活组织表面的、由其自身产生的细胞外基质包裹的有结构的菌细胞群体，是相对于单个分散的游离状态菌细胞而言的另一种微生物独特的生存形式［1］，其主要特征是具有高度耐药性［1～3］。卡泊芬净（caspofungin, CAS）是第一个被美国食品与药品管理局批准上市的棘球白菌素类抗真菌药物，是一种β—（l，3）—D—葡聚糖合成酶抑制剂，可特异地抑制真菌细胞壁的组成成分β—（l，3）—D—葡聚糖的合成。主要用于治疗其他抗真菌治疗无效或不能耐受的念珠菌和曲霉感染。其高效安全，患者耐受性好，目前国内外逐渐开始广泛应用，是一种很有前途的系统性抗真菌药物［４］。本研究通过标准化的念珠菌生物膜抗真菌药物敏感实验法检测卡泊芬净对抗白念珠菌生物膜的作用。
1 材料与方法。
1.1 材料。
1.1.1 药物。
两性霉素B（amphotericin B ,AMB，上海新先锋药业公司提供，批号070103），CAS(默沙东制药有限公司提供，批号J3930）。
1.1.2 试剂。
“甲基四氮盐（XTT）—维生素K3（menadione）”溶液：XTT粉末(Sigma公司)用林格液稀释（0．5 g／L）后用0．22 μm孔径的滤器过滤消毒；维生素K3 (Sigma公司)用丙酮稀释（10 mmol／L）；将维生素K3加入到XTT溶液中，致其终浓度为1 μmol／L，现配现用。
1.1.3 菌株。
白念珠菌株30株，均来源于上海长海医院真菌室收集的临床标本。将白念珠菌接种到沙堡琼脂糖培养基（sabouraud‘s dextrose agar，SDA）上，在37℃环境下过夜。挑取单克隆菌株，加入到1 ml酵母蛋白葡萄糖液基（yeast peptone dextrose，YEPD）中活化，在摇床（30℃，100rpm）上培养24 h；取10 μl活化后的菌液，再次活化；取2次活化后的10 μl菌液，加入1 mlYEPD培养液，在摇床上(30℃，100rpm)培养16 h。经血细胞计数器计数，将菌悬液的浓度配制为1.0×106 cfu/ml。传菌完毕后用80%甘油冻存白念珠菌。
1.1.4 培养基。
SDA及YEPD常规配制；1640培养液：1640粉（Invitrogen 公司）10.40 g、三氮吗啡啉丙磺酸(Sigma 公司)34.53 g、碳酸氢钠2.0g加三蒸水900ml溶解,用氢氧化钠将pH值调至7.0，定量至1000 ml，过滤消毒，40℃保存备用。
1.2 主要仪器。
HZQ—F160全温振荡培养箱（太仓市实验设备厂），96孔培养板（美国costar公司），霉标仪（Labsytems Dragon）。