鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究

作者：施婧妮,胡春玲,唐尹萍,赵刚,刘焱文。

【摘要】 目的 比较鳖甲生品和醋制品对大鼠肝星状细胞(HSCT6)增殖的影响，为鳖甲醋制品抗肝纤维化的临床应用提供依据。方法 传代培养的HSCT6与鳖甲生品和醋制品超声提取物，鳖甲生品和醋制品回流提取物共同培养72h后，采用MTT比色法测定各浓度组HSCT6的增殖情况。结果 两种提取方式相互验证了鳖甲生品和醋制品对HSCT6细胞增殖均有抑制作用， 且鳖甲醋制品的作用优于鳖甲生品。结论 鳖甲醋制品的抗肝纤维化作用优于鳖甲生品。

【关键词】 鳖甲;炮制前后;肝星状细胞 ; MTT法。

[Abstract] Objective To compare the imfluence of the crude and processed Trionyx sinensis carapace on rat hepatic stellate cell proliferation(HSCT6),thus toguide the clinical application of Trionyx sinensis carapace on the the treatment of liver fibrosis.Methods Secondary culture HSCT6 in vitro,which was cocultrued with the extracts (two extractions:ultrasonic and reflux) from raw and prepared Trionyx sinensis carapace,then MTT assay was applied to detect the impacts of Trionyx sinensis carapace extracts at different concentrations on HSCT6.Results The crude and processed Trionyx sinensis carapace can both inhibit proliferation of HSCT6,and the antiproliferation effects on HSCT6 were enhanced after processing,which was muturally authenticated by ultrasonic extraction and reflux extraction.Conclusion The processed Trionyx sinensis carapace has better function in antiliver fibrosis than the crude.

[Key words] trionyx sinensis carapace;preandpostprocessed;hepatic stellate cell;MTT。

鳖甲为鳖科动物鳖( Trionyx sinensis Wiegmann) 的背甲[1]，始载于《神农本草经》，收载于历年版《中华人民共和国药典》，具有滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸的功效，是治疗肝纤维化疾患的常用中药。以鳖甲配伍组方的中药复方制剂复方鳖甲软肝片、鳖甲抗纤方、鳖甲煎丸等均具有较好的抗肝纤维化作用[2～4]。肝纤维化是慢性肝病发展至肝硬化甚至原发性肝细胞癌的必经阶段，是各种慢性肝病的共同病理学基础[5]。在肝纤维化形成的过程中，肝星状细胞(HSC)的“持久化”激活和增殖是中心环节[6];阻抑激活的 HSC增殖和诱导促进 HSC凋亡是防治肝纤维化的重要措施[7]。关于鳖甲药材的现代临床应用，有人主张生品入药，有人推崇醋制品，莫衷一是。因此，探讨鳖甲炮制前后对HSC增殖的影响，对于指导鳖甲在临床上用于治疗肝纤维化疾患具有重要的现实意义。本实验采用两种提取方式，分别对鳖甲炮制前后的肝星状细胞增殖抑制作用进行了比较研究。

1 材料与方法。

1.1 材料。

1.1.1 大鼠肝星状细胞系(HSCT6) 浙江大学附属第一医院肝病研究所提供。

1.1.2 试验药物及主要试剂 (1)试验药物：鳖甲由浙江衢化医院提供，按2005版《中国药典》净制(生品)和醋制(醋制品)，粉碎后过80目筛。(2)细胞培养试剂：胰蛋白酶(trypsin)、非必需氨基酸(NEAA)、 HighDMEM培养基，GIBCO公司产品 ;胎牛血清，武汉三利生物技术有限公司产品;青霉素、链霉素，华北制药股份公司产品;二氧化碳(CO2)，武汉市明辉气体科技有限公司。(3)细胞增殖用试剂：二甲基亚砜 (DMSO)、噻唑蓝 (MTT) ，武汉凌飞科技有限公司。

1.1.3 仪器 CO2培养箱，日本 SANYO公司产品;全自动酶标仪，美国 BioRad公司产品;倒置相差显微镜，日本Olympus公司产品;洁净工作台，上海博迅医疗设备厂产品。