川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元内Caspase3表达的平均光密度和阳
【摘要】 目的: 探讨川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Caspase3表达的平均光密度及阳性面积率的变化。 方法 : 使用青霉素致痫大鼠模型, 采用BL 410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层痫样放电, 待癫痫样放电稳定后, 腹腔注射不同剂量的TMP, 待其抑制作用最明显时, 取大脑切片,观察大脑神经元内Fas表达的变化。结果: TMP对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Caspase3表达的平均光密度及阳性面积率显著降低。结论: TMP对青霉素致痫大鼠大脑神经元有明显的保护作用。 论文网。
【关键词】 川芎嗪； 癫痫放电； 神经元； 青霉素； Caspase 代写论文。
川芎嗪, 化学结构为四甲基吡嗪( tet ramethylpyrazine,TMP)。TMP可抑制海马神经元的放电活动, TMP可明显抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及体重下降［1］,大剂量TMP对缺血、缺氧性脑损伤、海马CA1神经元的缺血性损伤有改善或保护作用［2,3］。TMP已被广泛 应用 于心、脑血管闭塞性疾病的 治疗 ［4］。Caspase3是在调控细胞凋亡过程中的比较重要的蛋白质，Caspase3是Caspase家族中比较重要的一员。Caspase是cystEinecontaining aspartate specific protease的缩写，即含半胱氨酸的天冬氨酸特异水解酶。Caspase家族是一组蛋白水解酶，其特点是：①它们都有发挥酶活性所必须的半胱氨酸；②都能特异地裂解天冬氨酸位点；③前体蛋白均无活性，均需经蛋白水解后才产生活性；④转染不同细胞可诱导凋亡。根据其发现的顺序给予编号，迄今为止共发现了14个成员。根据Caspase 的一级结构和介导蛋白质—蛋白质相互作用的N末端的原结构域，可将其分为2类：①启动子Caspase，如Caspase8、Caspase9和Caspase10，它们通过自身催化而激活；②效应子Caspase，如Caspase3、Caspase6和Caspase7，它们能分解细胞蛋白，起凋亡执行器的作用。 目前 认为Caspase是一切凋亡信号传导的共同通路，各种Caspase如同凝血因子一样“瀑布式”(cascade)层层激活，最终引发细胞凋亡［5～7］。 论文代写 本课题采用免疫组织化学方法、图像 分析 技术检测了TMP对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Caspase3表达的平均光密度及阳性面积率的变化 影响 , 并进一步探讨其作用机制。
代写论文。
1 材料与方法。
1.1 材料。
1.1.1 实验动物 SD大鼠(由武汉大学医学院实验动物中心提供) , 雌雄不拘, 体重200～ 250g。 论文网。
1.1.2 实验药品及试剂 盐酸川芎嗪注射液( 批号0107001 ) , 常州制药厂生产；注射用青霉素钠( 批号00109306) , 华北制药股份有限公司生产。 论文代写。
1.1.3 实验仪器 BL410 生物机能实验系统, 成都泰盟 电子 有限公司生产；江湾IC型立体定向器, 第二军医大学器材处生产。 代写论文。
1.2 方法。
1.2.1 癫痫动物模型 实验选用健康SD 大鼠, 用10% 乌拉坦以10m l·kg—1体重腹腔注射( ip ) 麻醉, 将动物固定在江湾I2C 型立体定向器上,于大脑左、右两侧前卤后3mm , 矢状缝旁开3mm 行开颅手术, 暴露大脑皮层记录区域(2mm ×2mm),将银球电极置于左、右两侧的记录部位,信号输入置BL410 生物机能实验系统, 进行左、右两侧脑电记录。用浸有青霉素溶液的明胶海绵(200u/mm3)置于左侧大脑皮层表面, 诱发大鼠大脑皮层癫痫样放电, 待癫痫放电稳定后, 移去明胶海绵, 用浸有温热生理盐水棉球盖住创口。 代写论文。
1.2.2 试验分组及取材 将实验大鼠随机分为5组, 每组8只: ①A 组(手术对照组) , 麻醉开颅手术1h后取大脑; ②B组(青霉素致痫组),青霉素诱发癫痫1h后取大脑； ③C组(TMP10mg·kg—1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射TMP(10mg·kg—1),待抑制作用最明显时取大脑； ④D组(TMP 20mg·kg—1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后, 再腹腔注射TM P (20mg·kg—1),待抑制作用最明显时取大脑；⑤E组(TMP40mg·kg—1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射TMP(40mg·kg—1),待抑制作用最明显时取大脑。
1.2.3 HE染色 常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(厚约4μm)及HE染色。 论文网。
1.2.4 免疫组织化学SP法检测Bcl2相关抗原 主要步骤： ① 组织切片5 μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗； ② 3%过氧化氢，37℃孵育10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min； ③ Bcl2采用微波抗原修复（3档，10 min），PBS洗4×5min； ④ 正常羊血清37℃孵育10 min以减少非特异性反应； ⑤ 一抗（Bcl2，1:50 )37℃孵育1 h，PBS洗4×5min； ⑥ 生物素标记的二抗，37℃孵育10 min，PBS洗4×5min； ⑦ 链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37℃孵育10 min，PBS洗4×5min； ⑧ DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应； ⑨ 苏木精复染，脱水，透明，封片。 论文网。