芦笋总皂苷含量测定的比色法研究
作者：赵建华， 宋擎， 汪素芳， 苏强， 张立伟。
【摘要】 目的考察糖类、氨基酸及黄酮类物质对茴香醛—硫酸法测定芦笋总皂苷含量时的影响，并确定该法的最佳比色条件。方法选用菝葜皂苷元为对照品，采用茴香醛—硫酸法，在429 nm处测定糖类、氨基酸及黄酮类物质的吸光度，并利用正交实验设计优化比色条件。结果在429 nm处3类物质除黄酮类有较小的末端吸收外均无明显吸收，干扰较小。最优比色条件为样品挥干，加入1%茴香醛无水乙醇溶液0.2 ml，100℃水浴30 min，冷却后测定。结论该法操作简便，干扰小，比色条件经济，可靠，便于实际应用。
【关键词】 芦笋边角料 总皂苷 茴香醛—硫酸法 干扰因素考察 比色条件优化。
芦笋Asparagus officinalis Linn.，学名石刁柏，为百合科天门冬属多年生草本植物，是一种药食两用的植物，其根茎入药，性苦，微辛，微温，功能温肺下气［1，2］。成分分析表明，芦笋中含有游离氨基酸、维生素、微量元素硒等多种营养成分，以及甾体皂苷、多糖、黄酮类等药用成分［3］，具有极高的药用价值。现代药理学研究表明：芦笋提取物对多种癌细胞均有抑制作用，具有降血脂、提高人体免疫功能、抗衰老等功能，其中，甾体皂苷为重要的物质基础［4］。国内外文献报道，芦笋中含有多种甾体化合物，已分离得到19种甾体皂苷［5～7］，结构分析表明，芦笋皂苷多为螺甾皂苷，其苷元多为菝葜皂苷元［4］。
目前，植物总皂苷的含量测定主要为比色法，选用不同的显色体系，常见有乙酸酐—浓硫酸法、高氯酸法、浓硫酸法、香草醛—高氯酸法、香草醛—硫酸法、对二甲氨基苯甲醛法及茴香醛—硫酸法等7种。我们前期研究发现［8］，针对芦笋总皂苷的测定，综合考虑各因素的影响，茴香醛—硫酸法优于其它6种方法。本文基于茴香醛—硫酸试剂与螺甾皂苷的专属性反应，以菝葜皂苷元为对照品，考察了芦笋中几种常见物质：糖类(葡萄糖、蔗醣、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、果糖)，氨基酸(半胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、赖氨酸、酪氨酸、亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、异亮氨酸)及黄酮类(槲皮素、芦丁)对茴香醛—硫酸比色法［9］测定芦笋总皂苷含量的影响，并利用正交实验法优化了茴香醛—硫酸比色法的最佳比色条件，以期为进一步精确测定芦笋总皂苷含量奠定基础。
1 仪器与材料。
1.1 仪器 HP 8453UV—Vis 吸收光谱仪（美国惠普公司）；UNICO 7200型可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］；BS110s电子天平（北京塞多斯天平有限公司）。
1.2 材料茴香醛（CP，天津市光复精细化工研究所）；菝葜皂苷元（中国药品生物制品检定所，批号110744－200508）；芦笋总皂苷（本室自制）；槲皮素(中国药品生物制品检定所，批号 200406)；芦丁(中国药品生物制品检定所，批号 020620)；所用单糖、双糖、氨基酸及其余化学试剂均为国产分析纯试剂。
2 方法与结果。
2.1.1 对照品溶液的制备。
精密称取菝葜皂苷元5 mg，置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，吸取1 ml溶液稀释至10 ml，即得。
2.1.2 样品溶液的制备依次精密称取芦笋总皂苷、各种糖类、氨基酸、黄酮各5 mg，分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，即得。
2.1.3 显色溶液的制备吸取8 ml无水乙醇于10 ml容量瓶中，加入1 ml浓硫酸，摇匀，冷却至室温，加入50 μl茴香醛，无水乙醇定容，摇匀，即得。
2.1.4 测定方法分别精密吸取“2.1.2”项下各溶液1 ml，挥干溶剂，加入新鲜配制的0.5％茴香醛—浓硫酸乙醇液0.5 ml，100℃水浴15 min，取出冷却，加入无水乙醇5.0 ml，茴香醛—浓硫酸乙醇液做空白，于350～800 nm波长进行扫描，比较3类物质对测定方法的影响。
测定结果显示，在429 nm（±1nm）附近菝葜皂苷元和总皂苷均有明显吸收峰，糖类在此处均无明显吸收（图1），说明糖类对茴香醛—浓硫酸法干扰很小；在同等条件下，15种氨基酸在429 nm（±1 nm）附近也均无明显吸收（图1），且曲线均在基线附近，说明氨基酸对茴香醛—硫酸法基本没有影响。图2显示，两种黄酮在429 nm（±1 nm）附近均有吸收峰末端，但吸收不是很大，说明黄酮类物质对茴香醛—硫酸法有一定的影响。