基质溶解素—1基因启动子多态性与急性心肌梗死的相关性

【摘要】 目的: 研究中国南方人群基质溶解素—1基因启动子1612 5A/6A多态性与急性心肌梗死的相关性。方法: 采用DNA测序法检测116例急性心肌梗死患者和105例对照的基质溶解素—1基因启动子序列。结果: ①基质溶解素—1基因启动子1612 5A/6A多态性的三种基因型（5A/5A、5A/6A、6A/6A）符合Hardy—Weinberg分布。②与对照组相比，心梗组的基质溶解素—1基因5A/5A和5A/6A基因型较多见，差异有显著性，P 0.01。③基因型的相对风险分析发现，5A/5A或5A/6A基因型携带者患急性心肌梗死风险是6A/6A基因型的3.050倍(95%可信区间:1.653—5.627)。结论: 基质溶解素—1基因启动子1612 5A/6A多态性可能与中国南方急性心肌梗死的遗传易感性相关联，5A等位基因是急性心肌梗死发病的一个独立危险因素。

【关键词】 基质金属蛋白酶基因 基因多态性 急性心肌梗死 危险因素。

Abstract: Objective: To investigate the relationship between the polymorphism of 1 612 5A/6A in the promoter of the stromelysin—1 gene and the acute myocardial infarction （AMI） in population of southern Chinese. Methods: Using DNA sequencing，the polymorphism of the stromelysin—1 gene was detected in both 116 AMI patients and 105 control subjects. Results: ① The allelic distribution of the stromelysin—1 gene in both groups matched the Hardy—Weinberg equilibrium (P 0.05).② The number of 5A allele of the promoter of the stromelysin—1 gene in patients with AMI was higher than that of the control group (P 0.01).③The odds ratio of the 5A/6A+5A/5A was 3.050(95% CI，1.653 to 5.627). Conclusion: The 1612 5A/6A polymorphism in the promoter of the stromelysin—1 gene is associated with AMI in southern Chinese. The 1612 5A allele in the promoter of the stromelysin—1 gene may play an important role in the pathogenesis of AMI.

Key words: metalloproteinases gene；gene polymorphsim；acute myocardial infarction；risk factors。

冠心病是一类多基因多因素疾病，有许多侯选基因参与疾病的发生。国内外学者研究表明，基质溶解素—1(stromelysin—1)基因启动子多态性与冠心病的发生和发展存在一定的相关性。本研究对116例急性心肌梗死患者组（心梗组）和105例研究对照组的基质溶解素—1基因启动子序列进行检测，通过比较基因型和等位基因频率在两种群体中的分布，分析急性心肌梗死的危险因素，评价基质溶解素—1基因启动子1 612位点5A/6A多态性与急性心肌梗死发病的相关性。

1 对象和方法。

1.1 研究对象。

1.1.1 心梗组：2002年7月至2003年11月收住温州医学院第一附属医院心内科，临床诊断为急性心肌梗死的患者共116例，年龄（67.9±9.8）岁，其中，男89例，女27例。急性心肌梗死的诊断标准参考文献[1]。

1.1.2 研究对照组:冠脉造影正常者67例，心肌桥者10例，健康体检者28例，年龄（66.0±9.3）岁，其中，男81例，女24例。

研究人群均为浙江温州地区汉族人群，无血缘关系。排除肝病、系统性红斑狼疮、恶性肿瘤、银屑病、甲状腺功能异常、深静脉血栓形成等疾病，并获受试者知情同意。

1.2 研究方法。

1.2.1 标本采集与DNA提取：①采用密度剃度离心法分离EDTA—Na2抗凝的3 ml静脉血，分离出的单个核细胞在—70 ℃保存。②DNA提取按上海生工的人类基因组DNA提取试剂盒进行。

1.2.2 引物设计与合成：参考文献[2]在特异性扩增基质溶解素—1基因启动子1612 5A/6A多态性区设计一对引物，正向引物：5‘GATTACAGACATGGGTCACG3‘，反向引物：5‘CATCACTGCCACCACTCTG3‘，由上海生工合成。

1.2.3 PCR扩增：①反应液组成：dNTP 0.2 nmol/L，引物200 nmol/L，PFU 1U/test，PFU缓冲液。②DNA模板量：基因组DNA 2μl（大约1.5μg）。③循环扩增条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共33个循环；最后72 ℃延伸5 min。④凝胶电泳：2%琼脂糖凝胶电泳，80 V×30 min，溴化乙锭染色，在紫外分析仪下观察，目标条带采用德国QALTMquick GEL RETRIT KIT进行回收。