微波技术在阴道分泌物涂片单染色中的应用
【摘要】 目的 探索微波技术在阴道分泌物涂片美蓝单染色的效果和应用评价。方法 对阴道分泌物涂片分别采用微波美蓝单染色技术(改良染色组)和传统革兰染色法(传统组)进行染色镜检，评价两种方法的染色速度、灭菌效果。结果 两组染色效果差异无显著性;但改良组染色速度比传统法明显缩短;杀菌作用也优于传统组(P均0.05)。结论 阴道分泌物涂片微波改良染色技术效果良好，方便安全快捷可以满足临床实验要求，值得推广。
由于我院是妇幼专科医院，阴道分泌物涂片染色镜检是提高阴道疾病诊断措施之一，标本量大，需要摸索出快捷简易的方法，以方便病患的及时诊断。传统的染色方法手工繁杂，时间长。为此，我们通过长期临床试验，利用微波美蓝单染色法改进传统染色，取得了良好效果，大大缩短了操作时间，现对该方法的临床应用结果报告如下。
1 材料与方法。
1.1 仪器 5档美的公司生产的PJ21C—AN型微波炉，输出功率700W。自制多层活动染色架。
1.2 试剂 自配革兰染液、碱性美蓝染液、增菌营养肉汤平皿[1]。
1.3 方法。
1.3.1 随机选取2006年5～6月份来我院门诊就诊的6 453例阴道分泌物涂片检查患者，由临床医生按操作规程采样涂片，自然风干固定送检;其中70例涂两片。
1.3.2 取涂2 541例涂片严格按操作规程进行传统的革兰染色镜检[1]，发出报告，并记录每例所用时间，计算平均每例检查用时均值。取3912例，自然风干固定的涂片编号，划防漏线，滴加碱性美蓝染液约5～6滴，平放多层染色架上，每架3～20片，放入湿盒中，于微波炉内中火30s～2min，冲洗后立放玻片架上沥水后，放入微波炉内，取出湿盒，中火3min，再由2名高年资检验师作油镜镜检，观察效果;效果满意发出报告，并记录满意情况和每批次所用时间，计算平均每例检查所用时间均值。
1.3.3 取涂两片的20例涂片，一片严格按操作规程进行传统的革兰染色。另一片用微波美蓝单染色法染色，镜检后脱色，再用革兰染液复染镜检，对比两种染色方法的效果和脱色改染的前后效果。
1.3.4 取涂两片的50例涂片，一片按正常发出报告，另一片分两组，改良染色组(25片)用微波美蓝单染色法染色，传统组(25片)用革兰染色法染色,各分别单片放入增菌营养肉汤平皿中，35℃18h培养，比较杀菌情况。
1.4 统计学处理 用统计软件SPSS 11.5版本进行统计学处理。平均用时结果比较用成组设计t检验。杀菌作用比较用χ2检验。
2 结果。
2.1 微波美蓝单染色效果 微波炉中火，30s涂片染色偏浅，满意率低68%，1min容易导致染液蒸干烤焦，细菌和细胞形态改变，满意率低71%。小火需要1～2min，用时较长不达到缩短时间的作用。大火2min，容易蒸干烤焦。微波炉中火30s～1min效果较佳，满意率98%以上;细菌和细胞的有形成分结构完整、清晰、无变形、呈青蓝色，各结构成分对比明显，易于辨认，保持原有生物形态、结构特性和染色特性，背景无染料沉渣。经脱色重染或改染革兰效果满意。检出疑为淋病18例，霉菌861例，非淋非霉菌滴虫性阴道炎953例，细胞和菌体形态特征明显，经脱色革兰复染，革兰阴性双球菌、霉菌、革兰阳性球菌和杆菌、革兰阴性球菌和杆菌的特点，均与传统法染色保持一致。
2.2 平均每例检查所需时间 改良方法每批3～20例所需时间为(21±3)min，每例所需时间为(6±3)min，传统染色法每批3～20例所需时间为(32±5)min，每例所需时间为(15±5)min;改良组每例检查所需时间比传统组明显缩短(t=138.46，P0.05)，差异有显著性。
2.3 杀菌作用 改良染色组25片细菌培养阳性3片，传统组25片细菌培养阳性9片经χ2检验(χ2=3.95，P0.05)，差异有显著性。
3 讨论。
微波染色技术已经在国内外快速病理、组织化学、荧光免疫、抗原修复等染色方面得到了长足的发展[2～6]，并开发出RHS自控微波技术用于特殊染色和免疫组织化学染色等各种自动设备[7]。临床检验技术方面，微波在淋球菌的免疫荧光染色技术[8]和网织红细胞(RET)染色微波改良法等[9]，取得了良好效果。
由于传统的阴道分泌物涂片检查的染色过程操作繁杂费时。微波是一种波长为0.001～1mm的超高频电磁波，在高频变电场中物品偶极分子高速运动引起摩擦，使物体温度迅速升高，我们利用了微波共振原理，使细胞及菌体与染料在短时间内充分混匀，分子间碰撞机会增加，能迅速结合的特点，改良染色方法，也取得了良好效果。且短时微波辐射的热效应也能加速染色进程，而细胞和菌体不会破坏并固定。菌体和细胞结构着色清晰鲜明，细胞核染色深，背景无沉渣。
微波法在烤干过程中，随着辐射时间延长，非热效应能破坏病毒和细菌的染色体分子结构而具有消毒作用，且消毒时间短、方便、简易、无污染等优点[10]。Charm等[11]探索了血浆微波快速灭活病毒技术，从而克服了巴氏消毒法的局限性。同时带有水分的玻片温度升高，水分蒸发，达到烤干作用。与其它干燥灭菌方法相比，微波干燥灭菌具有产品均匀、质量好、速度快、适用性广、低温操作、安全可靠、高效节能、易于实现自动化、连续化操作和满足安全无害环保要求等诸多优点，在中药领域有着广阔的应用前景[12]。结合我们的细菌培养结果看，微波染色技术具有快速和消毒作用，且用时短。