高脂膳食诱导SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠肥胖形成和机制的探讨
作者：彭晓莉，陈 建，冷言冰，魏 敏，刘新。
【摘要】 Objective To explore the possible mechanism of obesity formation in SR—AⅠ/Ⅱgene knock—out mice.Methods SR—AⅠ/Ⅱ gene knock—out mice(KO)and wild type control mice(WT)were fed with normal chow control(CHOW)and high fat diet(HFD)to observe the effects of high fat diet on KO.Results The experimental diet promoted a significant increase in animal body weight over the 12—wk period.The body weight of KO—HFD were higher significantly than KO—CHOW and WT— HFD(P＜0.05);TC、TG、LDL—C、HDL—C of KO—HFD were higher significantly than WT—HFD(P＜0.01).Plasma glucose levels of KO—CHOW and KO— HFD were higher significantly than WT—CHOW and WT—HFD(P＜0.01).Plasma leptin and TNF—α levels of KO—HFD significantly increased than KO—CHOW（P＜0.01）.Conclusion SR—AⅠ/Ⅱ can affect serum lipid and glucose levels in mice.SR—AⅠ/Ⅱ deficient mice may due to reduction of leptin sensitivity.
【关键词】 scavenger receptor class A types Ⅰand Ⅱ;obesity;TNF—α;leptin。
A族Ⅰ型和Ⅱ型清道夫受体（scavenger receptor class A types Ⅰand Ⅱ， SR—AⅠ/Ⅱ）是表达于细胞表面的糖蛋白，主要表达于各组织、器官的巨嗜细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞，是巨嗜细胞清道夫受体家族成员之一［1］，参与巨嗜细胞的天然免疫、病原体清除、死亡细胞和细胞碎片的清除［2～4］ ，SR—AⅠ/Ⅱ与氧化型低密度脂蛋白（oxidized low—density lipoprotein，ox—LDL）结合，能促进巨噬细胞的胆固醇内流和泡沫细胞的形成，在动脉粥样硬化斑块形成中发挥重要作用。有报道SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除能导致血脂代谢紊乱，而SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除对肥胖的直接影响作用目前未见报道。本研究以SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生型对照小鼠为研究对象，探讨SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠肥胖的发生及其可能机制。
1 材料与方法。
1.1 饲料配方以美国营养学会1993年出版的啮齿类动物纯化饲料（American Institute of Nutrition—93 purified diets for laboratory rodents，AIN—93）作为普通基础饲料（CHOW）。高脂饲料（high fat diet，HFD）是在AIN—93G的基础上添加猪油调整脂肪含量至15％配制而成。
1.2 动物及分组SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除（knock—out，KO）雄性小鼠和野生型（wild type control，WT）雄性小鼠各36只，6～7周龄，平均体重27±2g，SPF级，由四川省医学科学院实验动物中心提供。动物放置层流架饲养，自由摄食和饮用蒸馏水。适应喂养一周，按体重将动物随机分为4组，每组18只，分别为：野生型小鼠普通饲料组（WT—CHOW）、野生型小鼠高脂饲料组（WT—HFD）、SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠普通饲料组（KO—CHOW）及SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠高脂饲料组（KO—HFD）。
1.3 实验方法动物按体重分组，禁食12 h取血后，给予不同饲料，每周称体重一次。喂养12周，结束实验。结束实验时，动物禁食12 h，小鼠眼眶静脉采血，急性放血处死，取血，分离血清，密封，—20℃冰箱保存。取附睾及肾周脂肪组织并称重。
1.4 主要试剂和仪器TC和TG测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司。HDL—C和LDL—C测定试剂盒，日本第一化学药品株式会社。血糖水平测定试剂盒，Bayer Healthcare LLC。RAT/MOUSE INSULIN ELISA KIT，LINCO Research。MOUSE LEPTIN ELISA KIT，LINCO Research。MOUSE TNF—α ELISA KIT，BIOSOURCE。紫外分光光度计，日本SHIMADZU UV mini 1 240。
1.5 主要检测指标。
1.5.1大鼠肥胖指标 体重、附睾周脂肪垫重量、肾周脂肪重量。
1.5.2 胰岛素、血脂及血糖水平测定 ELISA法测定血清中胰岛素水平，酶法测定总胆固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycerides，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low—density lipoprotein ，LDL—C）和高密度脂蛋白胆固醇（High—density lipoprotein，HDL—C），葡萄糖氧化酶法测血糖。
1.5.3 TNF—α和leptin水平测定 ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子—α（tumor necrosis factor—α，TNF—α）和瘦素（leptin，LP）的水平。
1.6 统计分析实验数据以表示，用SPSS 10.0 for Windows统计软件统计分析。多组均数比较用单因素方差分析，均数两两比较用SNK法。
2 结果。
2.1 高脂膳食对小鼠肥胖的影响由表1可见，饲以高脂饲料的野生型小鼠的终重高于饲以普通饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.05）；饲以高脂饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠的终重高于饲以高脂饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.05）；饲以高脂饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠终重高于饲以普通饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.05）。实验结束后，饲以高脂饲料和普通饲料SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠附睾周脂肪垫重量高于野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 高脂膳食对小鼠血脂水平的影响由表2可见，饲以普通饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血液TC、TG、LDL—C、HDL—C高于饲以普通饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.05）；饲以高脂饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血液TC、TG、LDL—C、HDL—C高于饲以高脂饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.01）。
2.3 高脂膳食对小鼠血糖和胰岛素水平的影响由表3可见，饲以普通饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血糖浓度高于饲以普通饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.01）；饲以高脂饲料的SR—AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血糖水平高于饲以高脂饲料的野生型小鼠，差异具有统计学意义（P＜0.01）。