肾穿刺标本的常规染色制作程序探讨
［摘要］ 目的：探讨肾穿刺标本制作技术特点，制订一套较快而稳定的制作程序。方法：对本科室5千多例肾穿活检病例制作的技术和步骤进行比较和总结。结果：本科室5千多例肾穿刺活检标本的冰冻切片，HE切片，PAS，PASM,Masson三色以及刚果红和甲基紫等特殊染色都完全满足病理诊断。结论：本科采用的肾穿刺活体标本制作程序稳定而且较快。
The Investigation of Routine Staining Procedure for Renal Biopsy。
LAI Yingrong，TAO Yu,LIANG Yingjie。
(SUN YATSEN University the First Affiliated Hospital,Guangdong 510080,China)。
Abstract：Objective To explore the technique skill of making specimens of kidney Biopsy via paracentesis and to create a set of stable and fast procedure.Methods The technique skill and procedures that we use to make more than five thousand kidney Biopsy specimens via paracentesis in our laboratory were compared and analyzed.Results All the specimens we made completely have accordance with the pathological diagnosis,including frozen section,HE section,and the specific stain such as PAS,PASM,Masson,Congo red and methyl violet.Conclusion The procedures we use to make kidney paracentesis specimens are stale and fast.
Key words：Kidney Biopsy via paracentesis；Technique skill；Procedure。
肾小球病是一种发病率较高疾病，肾穿刺活体检查是确诊肾病的重要手段［1］，因此各大医院纷纷开展肾穿刺活体检查项目。肾穿刺活检的标本主要来源于肾移植、肾病两种，这两种情况活检标本都相对较小，要做的检查相对较多，因而需将标本分成三份：常规HE及特殊染色；冰冻切片；电镜检查等，许多医院肾穿刺活体标本制作技术发展缓慢，虽然临床开展了肾穿刺活检和肾移植手术，但肾活检的标本制作仍未能满足临床病理诊断需要，影响其医院对肾病活检工作发展。我们对19年来肾穿活体制作技术和方法进行对比和总结，得出一套稳定而较快的肾穿刺活体标本制作的程序和方法，同时对各要点进行说明。使肾穿刺活检制作者获得一套较为标准的操作方法。
1 材料和方法。
1.1 中山大学附属医院及省内各大医院送来的肾新鲜标本5千多例，冰冻机是LICAl800，山顿、婴花，石蜡切片机为LICA2000R，脱水机为山顿全封闭脱水机，将新鲜的肾穿刺标本在放大镜下观察，确定是否有肾小球，然后将有肾小球的标本分成三份，一份作冰冻切片(最好有肾小球1个~4个)，二份作电镜检查(1个~2个肾小球)2％戊二醛固定，余下作常HE及特殊染色。冰冻切片一般切片7张~8张，厚度为4 μm~5 μm，作IgG、IgA、IgM、C3、Glq、Fg抗体检查，石蜡包埋切片2 μm~3 μm，分别作常规HE染色，PAS，MassonPASm以及刚果红和甲基紫等特殊染色。
1．2 六胺银法(PASM)。
1.2.1 Gomori六胺银染色法溶液配制 六胺银贮备液：5％硝酸银水溶液5 ml+3％六次甲基四胺100 ml,配好4 ℃冰箱备用；5％四硼酸钠水溶液；六胺银工作液：六胺银贮备液10 ml+双氧水20%+5％四硼酸钠水溶液2 ml。
1.2.2 PASm染色步骤。
切片脱蜡至水；0．5％高碘酸氧化30 min，水洗；10％铬酸氧化20 min，或2％硫酸铁铵水溶液用微波加温(低挡)2 min，水洗，1％偏重亚硫酸钠水溶液处理30 s，水洗，蒸馏水洗；放入六胺银工作液20 min~30 min 65 ℃水浴箱中或用微波加温(低挡)4 min，取出切片，蒸馏水洗，镜检以肾小球毛细血管基底膜出现黑色的沉淀为标准；0．1％氯化金水溶液调色30 s；流水冲洗10 min；Maery氏苏木素5 min；流水冲洗5 min；0．5％伊红染3 min；常规脱水透明封片。结果：肾小球囊基底膜和肾毛细血管球基底膜，弹力纤维及一些网状纤维是黑色，细胞核蓝褐色，细胞浆浅红色。
1．3 Masson三色法。
1.3.1 试剂配制。
丽春红酸性品红液：丽春红0．7 g+酸性品红0．3 g+蒸馏水99 ml+冰醋酸1 ml；1％磷钼酸水溶液：磷酸1 g+蒸馏水加至100 ml；2％苯胺蓝液：苯胺蓝2 g冰醋酸2 ml+蒸馏水100 ml。 1.3.2 操作方法。
切片脱蜡至水；Bouin氏液补充固定微波低挡2 min或60℃水浴1 h；流水稍洗；天青石蓝染液3 min；Mayer氏苏木素5 min；水稍洗；2％盐酸酒精分化；水冲洗数分钟；春红酸性品红液染5 min~10 min；蒸馏水稍冲洗；磷钼酸水溶液处理约5 min；直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5 min；1％冰醋酸1 min；95％酒精稍冲洗，常规脱水透明封片。结果：胶原纤维呈蓝色(用苯胺蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞，免疫复合物红色，细胞核蓝褐色。
1.4.1 试剂配制。
0．5％高碘酸水溶液：高碘酸0．5 g+蒸馏水加至100 ml；0．5％偏重亚硫酸钠液：偏重亚硫酸钠0．5 g+蒸馏水100 ml；无色品红液(Schitf氏试剂)：碱性品红1 g+蒸馏水200 ml+1 N 盐酸20 ml+偏重亚硫酸钠1．5 g+活性碳1．5 g。