尿路结石 维生素K3对尿路结石病人尿中骨桥蛋白浓度的影响
【摘要】 目的：探讨维生素K3对尿路结石病人尿中骨桥蛋白浓度的影响；从而观察维生素K3对尿路结石病人的治疗和预防复发的效果。
方法：随机选取30例尿路结石患为维生素K组，肌注维生素K312mg/d，连续7天；收集用药前后的尿标本；随机选30例正常人做对照组，收集尿标本；利用western blotting技术测定各尿标本中的骨桥蛋白含量；比较尿路结石患者用药前后及与正常人尿中骨桥蛋白含量的差别。
统计学方法：配对资料均数t检验。
结果：维生素K组用药后比用药前尿中骨桥蛋白含量高18.7%(P＜0.05）；用药前组比正常对照组尿中骨桥蛋白含量高93%，但差别无统计学意义（P=0.036）；用药后组比正常对照组尿中骨桥蛋白含量明显升高129%（P=0.0045，＜0.01）。
结论：临床应用维生素K可上调肾骨桥蛋白的表达，抑制结石的形成，对尿路结石的治疗和预防有一定效果，值得推广。
【关键词】 维生素K；雌二醇；尿路结石；骨桥蛋白；肾 Effect of Vitamin K3 on the concentration of osteopontin in the urine of the patients suffered from urolithiasis Li min, Zhao Guofang, Liu meiyun Department of Urology, Donghua Affiliated hospital, Sun Yat—sen University, Dongguan,Guangdong,523013 【Abstract】 Objective To investigate the effect of Vitamin K on concentration of osteopontin in the urine of patients suffered from urolithiasis; To investigate the effect of vitamin K in treating and preventing urolithiasis. Methods 30 patients who were suffered from urolithiasis were treated with vitamin K3 injection(12mg/d,for 7days) ; 30 normal persons for comparing; all urine specimens were collected in patients before and after treatment and in normal persons, respectively. The concentration of osteopontin in urine were detected with Western blotting. Statistics analysis is t test. Results The concentration of osteopontin in urine were 18.7% higher after vitamin K3 treated(P＜0.05). The concentration of osteopontin in urine in group vitamin K before vitamin K used were 93% higher than normal group, but there was no significance in statistics(P=0.36). The concentration of osteopontin in urine in group vitamin K after vitamin K used were 129% higher than normal group,(P=0.045,P＜0.05).Conclusion Vtamin K can clinically up—regulate the expression of OPN (osteopontin), and inhabit the formation of urolithiasis. Vtamin K have exact effect in treating and preventing urolithiasis, and could be extensively recommended. 【Key words】 Vitamin K, urolithiasis, kidney, OPN(osteopontin) 前言 泌尿系结石是一种常见疾病，治愈后有明显的复发倾向。
红外光谱分析表明，86％的结石中含有草酸钙，其治疗后复发率高达60％～80％。
近年来的研究发现，给服用诱石剂的大鼠每天皮下注射维生素K34mg能减少肾草酸钙结晶的数量[1]。
动物实验研究表明维生素K可通过上调尿中骨桥蛋白的表达来达到抑制结石形成的作用。
[2] 初步的临床研究提示:尿骨桥蛋白等抑制物分泌减少是尿石症发病的主要因素之一；结石病人尿骨桥蛋白测定具有一定的临床意义[3]。
目前维生素K3对尿中骨桥蛋白的影响研究仅见于试验研究，尚无维生素K对尿路结石病人尿中骨桥蛋白浓度的影响的临床研究报道。
本研究就是通过临床应用维生素K、探讨维生素K对尿路结石病人尿中骨桥蛋白浓度的影响；从而观察维生素K对尿路结石病人的治疗和预防复发的效果。
1 临床资料、材料与方法 1.1 临床资料 维生素K组（实验组）：30例，全为男性，年龄22—54岁，平均33.5岁，腰痛26例（隐痛20例、肾绞痛6例），血尿2例，另2例为体检B超发现。
体检：肾区叩击痛20例、输尿管区压痛3例，无阳性体征的7例。
辅助检查：全部行B超检查，发现肾结石者30例，合并输尿管结石者6例，结石大小3mm—34mm,平均12.3mm。
全部行IVU、KUB检查，发现阳性结石25例，另有5例X线阴性。
正常组（对照组）30例，全为男性，均为门诊非尿路结石的志愿者，年龄20—55，平均35.5岁，既往从未患过尿路结石，本次就诊免费泌尿系B超检查均未发现尿路结石。
1.2 处理方法：实验组30例全部临床肌注维生素K312mg/d,共7天，对照组不用维生素K处理。
收集实验组应用维生素K前后、对照组24小时尿液标本，冷冻于—20度冰箱备用。
1.3 实验方法： 1.3.1 取样 留取24小时尿样，尿液室温下溶解后如有难溶晶体物质统一用适量的EDTD溶液将其溶解，取5微升尿样加上样液混合后加样。
1.3.2 凝胶电泳 加样后聚丙烯酰胺凝胶电泳后，电转移70分钟至NC膜上。
1.3.3 western blotting方法测骨桥蛋白含量 摄氏37度温箱封闭2小时，封闭液为TBST溶解的5%的脱脂奶粉。
封闭结束后加入封闭液1：1000稀释的抗骨桥蛋白多克隆抗体（兔抗人）。
摄氏37度温箱孵育1小时，或者4度冰箱过夜，接着TBST漂洗3次，每次15分钟，一抗漂洗结束后加入1：1500稀释的二抗（羊抗兔）37度孵育1小时，TBST漂洗三次，每次15分钟，最后暗室曝光。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 1.3.4 电脑软件测灰度得出骨桥蛋白含量。
2 结果 维生素K组(实验组)用药后比用药前尿中骨桥蛋白含量高18.7%(P＜0.05）；用药前组比正常对照组尿中骨桥蛋白含量高93%，但差别无统计学意义（P=0.036）；用药后组比 正常对照组尿中骨桥蛋白含量明显升高129%（P=0.0045，＜0.01）。
3 讨论 3.1 维生素K3抑制结石生成的重要途径 维生素K3抑制结石生成的重要途径之一是通过提高维生素K依赖性Y谷氨酰羧化酶(VKDC)的活性，使尿中某些大分子蛋白的谷氨酸转化为Y羧化谷氨酸(Gla)，后者与钙结合，封闭结晶表面的生长位点，抑制结石的生长和聚集。
鼠的肾皮质及髓质部的微粒体中均发现存在VKDC。
对大鼠乙二醇诱石模型的研究发现，作为生物体内的一种代偿机制，肾组织中VKDC活性在结石形成后显著增高。
肾组织内VKDC活性的降低是草酸钙结石患者结石形成的重要因素[4]。
3.2 受维生素K影响的尿中抑石大分子蛋白主要有： 3.2.1 骨桥蛋白(osteopontin，OPN)：在人和鼠肾脏都有表达。
体外试验表明，OPN是一种强有力的草酸钙晶体聚集和细胞粘附的抑制剂，它包绕晶体，抑制其生长、聚集和粘附损害上皮细胞[5][6][7]。
在诱石剂(1％乙二醇+1％氯化胺饮水7天)作用下，鼠肾OPN mRNA表达增加，维生素K能使其表达进一步增加，并减少尿中的晶体成分[8]。
3.2.2 肾钙素(nephrocalein，Nc)：对单纯溶液中的一水草酸钙(COM)生长有强烈的抑制作用。
当尿中草酸盐增多时，肾微粒体内NC的羧化程度也相应提高，其结合COM的能力可提高2.5倍。
诱石成功的大鼠尿液中NC含量减少，且该尿液对COM聚集的抑制作用明显弱于正常鼠的尿液。
鼠肾NC中的Gla是在NC合成后通过维生素K3参与的羧化作用生成的，应用维生素K拮抗剂香豆素后，Gla的量发生减少，其对COM结晶生长、聚集的抑制率也同时降低[7]。
3.2.3 尿凝血酶原片段l(urinary prothrombin fragment 1，UPTFl)：UPTFI在尿中含量甚低，但在结石中的含量却超过其它蛋白，是草酸钙结石的主要基质蛋白。
UPTFI含有Gla，VKDC参与其活化。
应用维生素K拮抗药华法令抑制鼠肾VKDC后，uPTFl的等电点发生改变[9] 3.2.4 研究还发现，维生素K3有降低尿草酸排泄量的作用[1]，具体机理不明。
正常人之所以不形成结石,是由于尿中还存在着足够的结石抑制物,主要包括:Tamm—Horsfall 蛋白[10]、肾钙素、尿凝血酶原片段—1及骨桥蛋白。
维生素K不仅可通过上调肾钙素、尿凝血酶原片段—1及骨桥蛋白等三种结石抑制物的表达，而且维生素K3还可降低尿草酸排泄量，从而有抑制结石形成的作用。
3.3 实验研究表明维生素K有抑制结石形成的作用. 常连胜等实验研究发现维生素D和维生素K均可促进结石模型大鼠肾脏表达OPN mRNA；维生素D可升高尿钙，维生素K则抑制尿草酸的分泌，诱石剂有降低尿镁和柠檬酸的作用。
维生素D过多可促进肾结石形成，而维生素K有抑制结石形成的作用[4]。
进一步的实验研究表明：维生素K、雌二醇、睾酮可上调肾骨桥蛋白的表达，降低结石模型尿草酸和钙的浓度，偏光显微镜观察结果显示大鼠结石模型肾晶体沉积明显减少，因此认为可抑制结石的形成[2]。
3.4 我们的研究表明临床应用维生素K可上调肾骨桥蛋白的表达 目前尚未有维生素k临床应用对肾结石患者尿中骨桥蛋白浓度影响的报导。
我们的临床研究结果表明：维生素K组(实验组)用药后比用药前尿中骨桥蛋白含量高18.7%(P＜0.05）；比正常对照组尿中骨桥蛋白含量明显升高129%（P=0.0045，＜0.01）。
我们的临床研究结果与国内外文献报导的大鼠结石模型研究结果相似。
由此我们推断适量临床应用维生素k对尿石症有一定的治疗和预防作用，值得临床推广。
有必要对维生素k对尿石症的治疗和预防作用进行随机化大样本前瞻性及回顾性研究。
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中华泌尿外科杂志。
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