褪黑素对脊髓缺血－再灌注损伤的抗氧化作用
［摘要］ 目的：观察褪黑素对脊髓缺血－再灌注损伤的保护作用。方法：SD大鼠随机分为3组，一组仅行剖腹术，不钳夹动脉。另二组行缺血－再灌注术。分别在再灌注前后各5 min腹腔注射褪黑素和含2％乙醇的生理盐水。4 h后取腰骶段脊髓，测量组织中的丙二醛、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶。结果：再灌注后4 h，对照组组织中丙二醛显著升高，过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低，褪黑素组与对照组相比组织中丙二醛水平明显降低，而过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性增加。结论：运用外源性褪黑素能明显减轻脊髓缺血－再灌注后的氧化损伤。
Protective Effect of Melatonin on Experimental Spinal Cord IschemiaReperfusion Injury。
Abstract：Objective To observe the protective of melatonin on experimental spial cordischemia－reperfusion injury.Methods Male Spryue－Dwleys rats were divided into three groups,rats inone group only had laparotomy without aortic occlusion;in other two groups had their infrarenal arota temporarily occluded for 30 min,then were given either a 20 mg/kg single dose of melatonin and saline containing 2% ethanol intraperitoneally twice,5 min fefore aortic occlusion and 5 min after the clamp was removed.At 4hours after reperfusion,the animals were authanized and lumboscaral spinal cord tissue was removed for the determination tissular malondialdehyde(MDA) levels and relevant enzyme activities.Results Malondialdedhyde levels,indicating the shemoperated group.Catalase (CAT) and glutathione peroxidase(GSHPx) enzyme activities were decreased in the the nonmelatonin treated group compared to the shamoperated group.Melatonin can attenuate the changes(P0.05).Conclusion Melatonin can effectively protected spinal cord from ischemiareperfuion injury.
Key words：Spinal cord; Ischemiareperfusion; Melatonin; Lipid peroxidation。
各种原因引起的脊髓压迫及胸腹主动脉外科手术中主要根动脉的阻断、损伤均可造成脊髓缺血性损伤(spinal cord ischemic injury)，导致神经功能障碍。研究已证实，脊髓缺血后再灌注过程中可进一步加重神经元损害，造成脊髓缺血再灌注损伤，最终导致肢体神经功能进一步加重。中性粒细胞释放的氧自由基可损伤细胞膜［1］，自由基诱导的脂质过氧化是脊髓损伤致残的主要原因之一［2］。褪黑素(melatonin,MT)主要是由松果体分泌的激素，能直接清除自由基，减轻细胞的过氧化损害。本文通过生化指标的观察，了解MT对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与方法。
1．1 实验动物分组及药物准备。
健康封闭群SD雄性大鼠30只，体重220 g~250 g，随机分为3组，即：空白组，手术操作同其他组，不阻断血流。MT处理组，再灌注前后5 min腹腔注射褪黑素(20 mg／kg)各一次。对照组，持续缺血30 min，再灌注4 h。再灌注前后5 min腹腔注射即予含2％乙醇的生理盐水。MT购予瑞士ALEXIS公司，用无水乙醇溶解，生理盐水稀释，最终乙醇浓度为2％。
动物用质量浓度为10 g/L的戊巴比妥钠30 mg／kg腹腔注射麻醉后，取腹正中切口，仔细分离出左肾动脉，在左肾动脉入口处下方约0．5 cm处以动脉夹完全钳夹腹主动脉，证实钳夹点以下动脉搏动完全消失。钳夹30 min后，松开动脉夹再灌注4 h。室温保持在25 ℃左右，实验均在8:00~18:00之间进行。并在再灌注处理4 h后，立即取下腰骶段脊髓，以制备10％的脊髓匀浆。
1.3 丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)测定。
将立即取得的脊髓在0.01M冰磷酸缓冲液中漂洗，滤纸拭干，称重。用预冷的匀浆介质在冰浴下制成10％(w／v)的脊髓组织匀浆(匀浆介质按南京建成生物工程研究所提供的实验方法制备)，低温离心，取上清液，考马斯亮兰蛋白定量，比色法测定MDA、CAT、GSHPx。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。