高效液相色谱法测定六味能消胶囊中蒽醌类成分的含量
【摘要】 目的 建立六味能消胶囊中蒽醌类成分的高效液相色谱法含量测定方法。方法色谱柱：Kromasil C18色谱柱 (250 mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液(80∶20)；流速：1.0 ml·min—1；检测波长：254 nm。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总含量为2%以上，平均回收率为100.28%，RSD=2.22%。结论该方法简便、灵敏、准确，可作为六味能消胶囊的质量控制方法。
【关键词】 高效液相色谱法 芦荟大黄素 黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 六味能消胶囊。
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of anthraquinones content in Naomaitong. MethodsThe separation was performed on ODS column(250mm×4.6mm，5μm)of Kromasil. The mobile phase was a mixture of methanol—0.1% phosphoric acid solution(80∶20)，the flow rate was 1.0 ml·min—1,and the wavelength was at 254 nm. ResultsThe total content of aloeemodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion was above 4%.The average recovery rate was100.54 %，RSD= 1.58%. Conclusion The method is simple,accurate,sensitive and can be used to control the quality of Liuwei Nengxiao Capsule.
Key words： HPLC； Aloeemodin； Rhein； Emodin； Physcion； Chrysophanol； Liuwei Nengxiao Capsule。
六味能消胶囊由大黄、诃子、藏木香等6味药材组成，功能宽中理气，润肠通便，调节血脂，适用于治疗胃脘胀痛、厌食、纳差及大便秘结，还适用于治疗高脂血症及肥胖症。我们采用蒽醌类成分芦荟大黄素(aloe emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素(emodin)、大黄酚(chrysophanol)、大黄素甲醚(physcion)的含量，来控制六味能消胶囊的内在质量。本研究建立了六味能消胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法，并对3批样品进行含量测定。
1 仪器与试药。
1.1 仪器美国Waters 2695高效液相色谱仪；2996二极管阵列检测器；Empower色谱工作站；MILLI—PROA纯水处理器；BSzz4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
1.2 试药。
芦荟大黄素对照品(批号：110795—200605)；大黄酸对照品(批号：0757—200206)；大黄素对照品(批号：110756—200110)；大黄酚对照品(批号：110796—200615)和大黄素甲醚对照品(批号：110758—200610)，对照品均为供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供；，甲醇为色谱纯，水为高纯水，盐酸、氯仿、磷酸、冰醋酸等试剂均为分析纯。六味能消胶囊由西藏藏药股份有限公司提供。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件Kromasil Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相为甲醇—0.1%磷酸溶液(80∶20)；柱温：30℃；流速为1.0 ml·min—1，进样量10 μl；检测波长254 nm；要求理论板数不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每毫升含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80 μg，大黄素甲醚40 μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2 ml，混匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备取本品1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10%盐酸溶液∶乙醇(3∶1)20 ml，超声处理(功率400 W，频率42 kHz)3 min，酸液移至分液漏斗中，用氯仿提取5次，10 ml/次，合并氯仿液，水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至50 ml量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备按全方比例分别称取除大黄外其他药材适量，按六味能消胶囊的制备工艺制得缺大黄的阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。
2.5 各样品溶液的HPLC色谱图分别吸取供试品溶液，阴性对照溶液各10 μl及对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。记录其色谱图，结果表明六味能消胶囊中大黄5个蒽醌类成分色谱峰分离良好，且阴性样品溶液无干扰。见图1～3。