大承气汤对急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症的干预作用
作者：王春妍 范玉强 胡东胜 刘健勇 曹武奎。
【摘要】 目的观察大承气汤对急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症的干预作用。 方法取Wistar大鼠40只随机分为5组，即正常对照组(A组)，急性肝损伤造模组(B组)，大承气汤低剂量治疗组(C组)，大承气汤中剂量治疗组(D组)，大承气汤高剂量治疗组(E组)，每组各8只。取回肠内容物作细菌培养，并测定谷丙转氨酶(ALT)，总胆红素(TBIL)，血浆内毒素，血浆D—乳酸及血浆肿瘤坏死因子(TNF—α)。取肝脏行病理学检测。结果与A组相比，B组血浆内毒素、血浆D—乳酸、TNF—α、ALT、TBIL水平明显升高(P0.01)，回肠细菌培养结果所示，B组出现明显菌群失调(P0.01)。与B组比较，C、D、E组血浆内毒素、血浆D—乳酸、TNF—α、ALT、TBIL水平明显降低(P0.01，P0.05)，菌群失调状态改善。肝脏病理检测结果所示，B组大鼠肝细胞呈弥漫性大片状坏死，肝窦结构被破坏，汇管区可见大量炎症细胞浸润。C、D、E组肝脏病理改变明显减轻。结论大承气汤可改善急性肝损伤大鼠肠道菌群失调，降低血浆内毒素水平，对急性肝损伤肠源性内毒素血症具有明显干预作用，对急性肝损伤大鼠具有保护作用。
【关键词】 大承气汤; 急性肝损伤; 肠源性内毒素血症 ; 干预作用pared with B group ,endotoxin，the level of plasma D—lactate,TNF,ALT ,and TBIL were significantly decreased(P0.01，P0.05) in C ,D,E groups.，amel intestinal dysbacteriosis were improved significantly(P 0.05) . The pathological change of liver in C,D,E groups was significantly allevtiated. ConclusionDachengqitang protects rats from acute liver injury by improving intestinal dysbacteriosis and reducing the level of plasma endotoxin.
Key words:Dachengqtang; Acute liver injury ; Intestinal endotoxemia; Intervention。
当今肝病肠道菌群失调与肠源性内毒素血症的关系日益受到重视。在肝病时发生肠道菌群微生态失调,部分革兰阴性菌大量增殖，后者导致肠源性内毒素血症发生率升高，而内毒素血症在肝病的维持和发展中起到重要的作用，加重肝病。因此，肝病—肠道菌群失调—肠源性内毒素血症形成一个恶性循环。其中关键的一个环节就是肠道菌群失调所致肠源性内毒素血症[1]。如何控制肠源性内毒素血症是目前研究热点。本文即由此出发，探讨大承气汤对急性肝损伤肠源性内毒素血症的干预作用。
1 材料。
雄性Wistar大鼠40只，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。硫代乙酰胺购自天津市大茂化学仪器供应站。内毒素试剂盒购于湛江海洋生物制品厂。肿瘤坏死因子(TNF—α)放免试剂盒购于北京解放军总医院东亚免疫技术研究所。血浆D—乳酸试剂购于美国Sigma公司。选择性培养基由吉林大学基础医学院病原生物学教研室制备。大承气汤由长春中医药大学制剂室提供(含生药浓度为1 g/ml，浓度分别为50%，100%，250%)。
2 方法。
2.1 模型制备Wistar大鼠40只随机分为5组，即正常对照组(A组)，急性肝损伤造模组(B组)，大承气汤低剂量治疗组(C组)，大承气汤中剂量治疗组(D组)，大承气汤高剂量治疗组(E组)，每组各8只。C，D，E组大鼠于造模前2 d分别灌胃不同剂量大承气汤2 ml，A，B组予同等剂量生理盐水灌胃，继而B，C，D，E组大鼠均采用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)300 mg/kg，24 h后相同剂量重复皮下注射一次，48 h后完成急性肝损伤动物模型，造模完成后继续予药物灌胃3 d。A组大鼠予同等剂量生理盐水灌胃。处死所有大鼠，在无菌条件下腹主动脉采血，进行肝脏功能检测，血浆内毒素及肿瘤坏死因子测定，取回肠5cm进行回肠内容物细菌培养，取部分肝脏进行病理学检测。
2.2 标本的检测血浆内毒素测定采用鲎试剂反应动浊法; TNF—α检测采用放免法测定;血浆D—乳酸浓度检测采用改良酶学分光光度法。肝脏病理学检测：将经处理的肝脏组织制成常规石蜡切片，HE染色后进行组织学检查。肠道细菌定量培养：取回肠内容物约0.1 g加入1 ml生理盐水中，置于漩涡混合器振荡，形成匀浆液。再用生理盐水对匀浆液进行连续10倍稀释。取不同稀释度的稀释液50 μl滴种于培养基上进行细菌培养。
2.3 统计学方法采用SPSS10.0软件处理数据，组间比较用t检验。
3 结果。
3.1 大鼠一般状态观察TAA造模组大鼠处死前死亡3只，死亡率为30%，其余大鼠在处死前均出现不同程度的精神萎靡、活动减少、进食减少和反应迟钝，部分大鼠随着造模时间延长一般状态稍有好转，中毒性鼓肠发生率为71.42%。对照组大鼠未出现死亡及中毒性鼓肠。大承气汤治疗组的动物饮食量和排便次数明显高于造模组动物，一般状态较造模组大鼠好，处死前死亡大鼠3只，死亡率为10%(3/30)，中毒性鼓肠发生率为14.81%。