苦参碱对海马神经中枢抑制作用的研究:海马体
方法：采用离体大鼠、小鼠的海马区诱发场电位技术及HPLC分析技术观察苦参碱对大鼠、小鼠海马神经中枢的作用。
结果：离体大鼠海马区诱发场电位实验结果显示，苦参碱能够剂量依赖性地抑制青霉素钠诱导的神经元顺向信号传导激活过程，使大鼠海马细胞外记录到的场电位各个参数发生相应改变。
HPLC分析技术观察苦参碱对小鼠海马氨基酸神经递质的作用结果显示，苦参碱对小鼠海马神经大剂量(58．5mg/kg)在给药20min后γ—氨基丁酸（GABA）含量明显增加，与空白组比较有显著差异(P[1]。
据大量文献报道，苦参碱在中枢神经系统、心血管系统、抗病毒、抗炎、免疫及抗肿瘤抗纤维化等方面具有重要的药理活性和应用前途[2]。
近年来国内外在研究苦参碱的过程中，进一步发现了其多方面的药理作用，具有很大的再开发价值。
本文在中药苦参醇提取液镇静催眠药理学实验基础上，进行了苦参碱对海马神经中枢的作用研究。
1 材料 1．1 实验动物：健康ICR小鼠20±2g，健康SD大鼠200±20g，雌雄兼用，由浙江省中医药研究院动物房提供，浙动字医第22—9601009号。
1．2 药品及试剂：苦参碱购于中国药品生物制品检定所（批号：734—8701）；注射用青霉素钠购于石家庄制药集团有限公司（批号：010353）；戊巴比妥钠、醋酸钠、氯化钠、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、葡萄糖均购于中国生物制品有限公司；Pontamine sky blue（Chicago sky blue 6B）购于Sigma、谷氨酸(Glu)、γ—氨基丁酸(GABA)标准品、异硫氰酸苯酯（PITC）、三乙胺，均为Sigma公司产品。
苦参碱注射液，由珠海经济特区生物化学制药厂提供，批号：用药准字H20040593，规格，50mg/支，人用量1日3次。
1．3 仪器：室温预孵槽、界面式记录槽、高阻微电极放大器（FD223.WPI. Inc. USA）、直流前置放大器（FZG—81型，上海嘉龙仪器厂）、示波器（COS5020. Kikusui. Japan）、Power Lab（AD. Inc. Australia）、SCSI总线控制卡、冷光源（上海医用光学仪器厂）、 恒流泵（B—2.上海统一生化仪器厂）、Chopper切片机、刺激器（上海国泰仪器厂）、刺激隔离器（A360. WPI. Inc. USA）、微操纵器（DR3001.WPI. Inc. USA）、恒温控制器（XMTA201）、Micro—Tech Scientific Inc.HPLC高效液相色谱仪。
2 方法与结果 2．1 苦参碱对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区场电位PS的影响[3—4]：大鼠清醒状态下断头，迅速剥离出海马，在切片台上切成500μm厚的脑片放入预先通以95%O�2和5%CO�2混合气的ACSF中（pH为7．35）,室温下孵育1~2小时。
采用界面式孵育槽,记录电极插入海马CA1区诱发场电位，刺激电极置Schaffer侧支处，诱发的场电位经生物信号分析系统转换至计算机进行观察、记录。
采用灌流给药方式，正常对照组脑片稳定记录15~20min，仍一直采用正常脑脊液ACSF灌流；给药组脑片稳定记录15~20min后改为含1000kU/L的Penicillin Sodium的ACSFI液灌流10min，然后药物灌流30min；模型组脑片稳定记录15~20min，改为Penicillin Sodium灌流10min，然后正常ACSF灌流30min。
记录各组诱发场电位个数及幅度变化，观察苦参碱对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区场电位PS的影响。
实验结果见表1。
结果表明：青霉素1000kU/L使海马脑片CA1区诱发场电位个数及幅度增加，提示青霉素钠能诱发脑片高兴奋性。
0．1g/L、0．05g/L的苦参碱均能使青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片PS个数下降，与青霉素模型组比较有非常显著差异（P[5—7]：有数下几则。
2．2．1 色谱条件：Dikma Technologies C18柱（250×4．6mm)，检测波长254nm,进样量5μL，柱温室温，流速1ml/min，流动相A：0．1mol/L醋酸钠溶液(PH6．5)—乙腈(97:3),流动相B:乙腈—水(80:20)，并按表2件进行梯度洗脱。
2．2．2 标准曲线：精密量取对照品液谷氨酸（366 μg/mL）20μL、40μL、80μL、120μL、160μL、200μL，各管分别加入γ—氨基丁酸（396μg/mL）10μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL，加纯水至0．5mL再加入0．5mL的0．5%的异硫氰酸苯酯—乙腈溶液，0．5mL的1mol/L三乙胺—乙腈溶液，充分混匀静置反应1h后加入1mL正已烷进行萃取，充分进行振荡后静置1h，1h后移取下层液作为HPLC测定液进样分析。
在所考察的浓度范围内即谷氨酸在4．88∽48．8ug/mL，γ—氨基丁酸在2．64~26．4μg/mL呈良好线性关系。
以浓度（X）对其相应的峰面积（Y）做回归方程，谷氨酸回归方程为Y=2801．3X—1198．5（R2=0．9999）；γ—氨基丁酸的回归方程为Y=4498．3X＋1012．1（R2=0．9999）。
2．2．3 实验样品制备方法：取健康小鼠120只，30只/组。
给药方式为尾静脉注射，注射剂量0．1mL/20g，给药剂量分别为大剂量58．5mg/kg，中剂量39mg/kg，小剂量19．5mg/kg，实验时苦参碱注射液用生理盐水进行稀释配制。
每组分别于给药后20min、40min、60min各取10只小鼠断头取海马，称重后取0．6mL无水乙醇入匀浆器匀浆。
每个海马分别匀浆，匀浆液入冷冻离心管，以4℃，15000r/min条件下离心两次，每次20min，将上清液以0．45μm的微孔滤膜滤过,取滤液分装,冷冻保存待测。
测定方法同对照品衍生方法，观察各组给药后不同时间苦参碱对小鼠海马氨基酸的变化。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 实验数据用x±sd表示，显著性差异用t’test检验。
P[8—9]。
从苦参碱对大鼠海马脑片电信号的作用研究结果显示苦参碱对海马神经细胞激活具有一定抑制作用，结合HPLC分析技术，观察到苦参碱能提高小鼠海马内γ—氨基丁酸含量。
以上结果可以推测苦参碱对海马神经中枢有一定的抑制作用，能抑制海马神经激活， 并且通过增加海马内抑制性神经递质γ—氨基丁酸含量而发挥其中枢抑制作用，其具体作用机理还有待于进一步实验研究。
现代社会竞争激烈，人们生活、工作节奏加快，市场对镇静催眠药的需求很大，遵循传统医学理论，从天然中药中寻找有效的药物一直是人们研究的热点。
因此开展苦参碱对海马神经中枢的作用研究，对于扩大苦参碱的应用以及对中药苦参进一步开发利用具有积极意义。
4 参考文献 ［1］刘文雅,刘汉清.苦参碱的药理研究进展［J］.中华实用中西医杂志,2006,19(4):473. ［2］郑占虎,董泽宏,佘靖.中药现代临床与应用第三卷［M］.学苑出版社,1998:2694—2721. �［3］Xu� S M, He J Y, Lin L X,et al. Effect of cassia twig on evoked field potential of CA1 of hippocampal in epileptogenic rat［J］.Chin Tradit Herb Drugs,2001,32(10):916—918. �［4］Shou� C H, Wang J, Zheng X X,et al. Inhibitory effect of jujuboside A on penicillin sodium induced hyperactivity in rat hippocampal CA1 area in vitro［J］Acta Pharmacol Sin,2001,22(11):986—990. ［5］程涛,潘晓军,张丽.脑海马脑片灌流液中谷氨酸与氨基丁酸含量测定［J］.山东医药，2002,42(4). ［6］谭来勋,孙圣刚,王细林.发育期大鼠海马氨基酸类神经递质的研究［J］.卒中与神经疾病，2005,12(2):101. ［7］赵刚,张嘉麟,李树清.HPLC—PITC衍生法测定灌流液中氨基酸变化的研究［J］.昆明医学院学报，2004,(1):26. ［8］王绪平、陈庆梅,郑筱祥.苦参醇提取液镇静催眠作用的实验研究［J］.中草药,2004,35(5):551. �［9］CHEN� Qing—mei, WANG Xu—ping,et al. Quantitative Analysis of Population Spikes and Its Application in CNS Evoked Discharge Changes by Matrine［J］. Space Medical Engineering,2004,17(4):3031. 收稿日期 2007—05—16 注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。
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