红毛五加多糖对荷人喉癌裸鼠抗癌作用的研究
刘国龙 毛海波 伍勇 翁成荫 吴红瑛。
【摘要】 目的采用人喉癌裸鼠移植模型及电镜观察，研究红毛五加多糖的抗肿瘤药理作用和可能机制。方法建立人喉癌裸鼠移植模型，观测红毛五加多糖（AGP）与对照组的抑癌率；电镜观察 AGP 引发的癌细胞超微结构改变。结果AGP 对裸鼠移植人喉具有明显的抑制作用，平均抑瘤率为 47.21% ，对荷癌裸鼠体重增长无明显抑制作用，透射电镜观察发现AGP可诱导大量肿瘤细胞凋亡和少量直接坏死。结论 AGP 对人喉癌有明显的抑制作用，诱导癌细胞凋亡是其主要作用机制，对实验动物的生长无明显影响。
Abstract：ObjectiveTo study the anti—tumor effect of AGP on nude mice inplanted with human laryngeal carcinoma cells and its machanism.MethodsThe tumor inhibitory rate was measured on nude mice implanted with human laryngeal carcinoma cells and the super—microstructure change of cancer cells was observed by transmisssion electron microscope.ResultsThe inhibitory rate of the implanted cancer in AGP group was 47.21%,transmission electron microscope observation results showed that AGP induced cell apoptosis more than direct necrosis.ConclusionAGP can inhibit the growth of implanted human laryngeal carcinoma cells by inducing apoptosis .AGP has no side effect on growth of nude mice in this trial.
Key words：AGP; Nude mice model ; Human laryngeal carcinoma。
喉癌(laryngeal carcinoma)是头颈部常见的恶性肿瘤。目前喉癌的治疗仍以手术为主。晚期喉癌术后多辅助放射治疗和化学治疗。但喉癌对目前的常用化疗药物反应较差，多联多周期化疗时毒副反应明显。红毛五加多糖(canthopanax giraldil Harms var hispidus Hoopolysaccharides,AGP)是中药红毛五加的地上茎皮水溶性提取物经分离纯化得到的精华成分。多糖类具有增强免疫功能、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性［1］。近 10 年来有关AGP 辅助抗癌的研究报道很多，但未见对喉癌的研究报道。本文通过人喉癌裸鼠移植模型观察AGP 对人喉癌的作用，并通过电镜观察探索其可能的机理。
1 材料。
1.1 药品与试剂AGP ，由广州市第一人民医院制剂科提供；阳性对照药猪苓多糖注射液（zhu ling polysaccharide,ZP），连云港正大天晴制药有限公司产品；环磷酰胺（cyclophospha—midum,Cy），上海华联制药有限公司产品。
1.2 动物与瘤株BALB/c系裸小鼠（mudemice,NM），由南方医科大学动物实验中心提供，6～8 周龄雌雄兼用，放置在空气净化室内繁殖、饲养、室内保持（25±2）℃。全部实验过程达到SPF(SpectficPathogen—free)条件。人喉癌瘤源（CNE—1）由南方医科大学中心实验室提供。
2 方法。
2.1 喉癌接种将瘤源裸鼠脱颈椎处死，取出喉癌肿瘤组织，切成2 mm×2 mm×2 mm 的小瘤块，用套管针将瘤块接种于每只裸鼠的背部皮下，形成人喉癌裸鼠模型。
2.2 动物分组及实验方法裸鼠 48 只，接种后次日随机分为 4 组，即空白对照组、Cy组、ZP组、AGP组。实验组于接种 24 h 后每只皮下注入红毛五加多糖液 0.2 ml ，对照组在同样条件下分别每只皮下注入生理盐水＼猪苓多糖注射液＼环磷酰胺每只 0.20 ml（调节药物浓度使药量达到10 mg/kg 体重），1次/d，连续 30 d。各组裸小鼠分别从给样品后15 d 起每3天做1次活体肿瘤大小测量，以最大长径（L）和横径（S）按下式计算肿瘤体积（V），绘制不同治疗组肿瘤生长曲线，V（mm3）=0.5×L×S2。停药次日处死动物，按下式计算抑瘤率：
抑瘤率（%）=1—给药组平均瘤重对照组平均瘤重×100% 电镜观察：处死动物后，立即取出0.5～1 mm3 大小的癌细胞，迅速侵入预冷的前固定液（2.5% 戊二醛加 2% 多聚甲醛）固定 4h ，再用 1% 锇酸作用后固定 2 h ，酒精、丙酮梯度脱水，Epon812 渗透包埋，LKB 型超薄切片机切片，铀铅双重染色，在投射电镜下进行观察。
3 结果。
3.1 对裸鼠体重增长的影响结果见表1。空白对照组裸鼠的体重与 30d 前比较，体重增加显著（t值检验，P＜0.001）；与空白对照组比较：AGP组P＞0.05；ZP组P＜0.05；Cy组P＜0.01。AGP 对实验裸鼠的生长无明显影响。而 ZP 与 Cy则有不同程度的抑制作用。表1 AGP 对荷人喉癌裸鼠体重的影响（略）。