不同来源白头翁药材的皂苷含量比较
作者：时维静,胡跃进,王海侠,谭志静。
【摘要】 目的 以白头翁皂苷B4作为指标,考察不同来源白头翁的质量,为白头翁的加工和选用提供参考。方法 采用高效液相色谱法,对购自亳州中药材大市场白头翁药材与饮片5个样品和滁州野生白头翁进行含量测定。结果 在0.312 5～10 μg范围内线性关系良好,回归方程Y＝276 350X－12 180,R2＝0.999 6。结论 不同来源的白头翁药材皂苷B4含量差异较大。
【关键词】 白头翁；产地；白头翁皂苷B4；含量测定；高效液相色谱法。
Key words：Pulsatilla chinensis；original place pulchinenoside B4；content determination；HPLC 白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis(Bge.) Regel的干燥根[1],为多年生草本植物,具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效。目前市场上以野生采集品为主,由于产地不一,加工和饮片的切制方法不同,对有效成分的含量影响较大。本试验从亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材3种、饮片2种,采集滁州凤阳九华山野生白头翁,计6个样品。以白头翁皂苷B4为对照品,采用高效液相色谱法测定其含量,为白头翁的加工和选用提供参考。
1 材料。
美国Waters 1525型高效液相色谱仪,2487 DAD紫外检测器,Breeze色谱工作站(美国Waters)；TU—1810SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)；BS21S精密电子天平(德国赛多利斯天平有限公司)。白头翁皂苷B4,暨南大学叶文才教授惠赠。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果。
市场样品采集于2006年9月,在亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材A、B、C 3种及饮片D、E 2种。A产地长春；B产地河南；C产地安徽；D购自亳州京皖饮片厂,产地内蒙古；E购于亳州中信饮片厂,产地安徽。
滁州凤阳九华山白头翁于2006年8月采集,清水洗净,拭干,立即置105 ℃干燥箱杀酶5 min,取出,待温度降至50 ℃,再放入干燥箱中烘干,编号为F。
2.2.1 检测波长的确定。
取白头翁对照品溶液,以甲醇溶液作空白基线,在400～190 nm波长范围内扫描。结果表明,白头翁皂苷B4在205 nm波长处有最大吸收,甲醇溶液对样品的测定无干扰。
2.2.2 色谱条件。
固定相：ZORBAX SB—C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相：乙腈—水(28∶72)；体积流量1.0 mL/min；检测波长205 nm；柱温：室温。
2.2.3 标准曲线的制作。
称取5.0 mg白头翁皂苷B4置10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇均,即得0.5 mg/mL浓度的白头翁皂苷B4溶液,取5 mL置10 mL容量瓶中,甲醇定容至刻度得0.25 mg/mL,依次类推,进行倍比稀释得0.125、0.625、0.031 2、0.015 6 mg/mL 6个梯度浓度的对照品溶液,进样量20 μL。以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程Y＝276 350X－12 180,R2＝0.999 6。白头翁皂苷B4在0.312 5～10 μg范围线性关系良好。
2.2.4 供试品溶液的制备 精密称定各样品白头翁粗粉20.0 g,置圆底烧瓶中,加95%乙醇溶液100 mL回流提取2 h,提取3次,过滤,静置12 h。回收乙醇浓缩至20 mL,取1 mL放入100 mL的容量瓶中,加甲醇定容至刻度,即每毫升溶液相当于0.01原药材。于0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2.2.5 系统适用性考察。
在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,测定。结果表明,供试品中白头翁皂苷B4与其相邻峰的分离好,保留时间适中(近8 min)。结果见图1。