4种黄连生物碱的抑菌作用
【摘要】 目的小檗碱，药根碱，黄连碱和巴马亭是黄连中4种主要的生物碱，为深入研究4种黄连生物碱成分的抑菌特性差异，本实验对它们的抑菌谱和抑菌活性进行了实验研究。 方法以从石柱黄连中提取的4种生物碱为实验药物，采用抑菌圈实验法，在2 000 μg/mL药液浓度下对常见的19种微生物进行了药物敏感性试验,并通过比浊法对敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）进行了检测。结果4种生物碱成分的敏感菌范围相同但抑菌活性不同，其中小檗碱的抑菌活性最大,黄连碱和巴马亭次之，药根碱最小；4种黄连生物碱对革兰氏阳性菌的抑制活性大于革兰氏阴性菌和酵母菌；每种生物碱对耐药金葡菌（MR）和金葡菌的抑菌能力基本相同。结论4种黄连生物碱均为黄连的抗菌活性成分，抑菌谱相同，但抑菌活性有较大差异；4种黄连生物碱对耐药金葡菌的耐药性具有消除作用。
Abstract:ObjectiveBerberine, jatrorrhizine, palmatine, and coptisine are four leading alkaloids from Coptidis rhizome. To research the characteristics of antimicrobial activity of above alkaloids, the antimicrobial spectrums and abilities of them were determined in this paper.MethodsSensitivities of 19 microorganisms to berberine, jatrorrhizine, palmatine, and coptisine were studied under medicine concentration of 2 000μg/ml by antimicrobial circle experiment and their Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) against 14 sensitive microorganisms were determined by colorimetry in this study. ResultsFour alkaloids from Coptidis rhizome had the same antimicrobial spectrums and different antimicrobial abilities, the antimicrobial activity of berberine was the strongest, coptisine and palmatine was relatively weak and jatrorrhizine was the worst. The antimicrobial abilities of four alkaloids against G+ bacterium were stronger than against G－ bacterium and fungus. The same activity of four alkaloids against Methicitlin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Staphylococcus aureus were observed.ConclusionAll alkaloids tested are antimicrobial activity ingredient of Coptidis rhizome. Four alkaloids almost have the same antimicrobial spectums and have different antimicrobial abilities. All alkaloids tested can dispose the drug resistance of Methicitlin resistant Staphylococcus aureus (MRSA).
Key wordsCoptidis rhizome; Berberine; Jatrorrhizine; Palmatine; Coptisine; Antimicrobial activity。
黄连是中医临床上的常见抗菌消炎中药，在临床上除主要用于治疗菌痢、肠炎、腹泻、胃炎等细菌性胃肠炎疾病。研究表明，黄连中的抗菌消炎的物质基础主要是其中所含的原小檗碱类生物碱成分，而小檗碱，药根碱，黄连碱和巴马亭是黄连中4种主要的生物碱成分，在分子结构特点上均属异喹啉类生物碱,具季铵基团［1］。为深入研究黄连中不同生物碱成分的抑菌活性差异和拓展黄连生物碱的应用领域，从石柱黄连中提取了小檗碱、药根碱、黄连碱和巴马亭，以常见的19种动植物病原菌为实验菌进行药物敏感性实验并对敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）进行检测，以期为扩展小檗碱和其它黄连生物碱的应用范围和临床用药提供科学依据。
1 器材。
实验药物：小檗碱、药根碱、黄连碱和巴马亭（由实验室从石柱黄连中提取分离制备，HPLC检测纯度均在97%以上）。实验菌株：金黄色葡萄球菌 (ATCC25923)，金黄色葡萄球菌耐药菌（MR），脓肿分枝杆菌，伤寒杆菌，绿脓杆菌，志贺氏痢疾杆菌，克雷伯氏菌，肠炎沙门菌，巨大芽孢杆菌，枯草杆菌，大肠杆菌变形杆菌，白色葡萄球菌，假丝酵母，白色念珠菌，四联球菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌（实验菌株由重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室和西南大学资源与环境科学学院微生物教研室提供）。
培养基：真菌采用改良沙保氏培养基（配方为：蛋白胨10 g，葡萄糖20 g，蒸馏水1 000 ml），鱼病原菌（鲑肾杆菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌）采用胰蛋白胨醋酸钠培养基（配方：胰蛋白胨5.0 g， 醋酸钠2.0 g，酵母膏5.0 g，牛肉膏0.2 g，蒸馏水1 000 ml），其它细菌采用普通细菌培养基加减成分进行培养。配制时固体培养基加入1.5%的琼脂，液体培养基不加。
实验设备：96微孔板，酶标仪，超净工作台，灭菌锅，恒温培养箱。
2 方法。
2.1 微生物敏感性实验将备选的菌种采用较高浓度的药液进行药物敏感实验，初步确定3种生物碱对实验菌的抑菌作用，为进一步研究药物对敏感菌的抑菌能力提供依据。
方法为：①药液配制及纸片制备：将每种药液均配制成浓度为2.0 mg/ml的溶液，将直径6.35 mm的纸片浸泡于药液，100℃/30 min灭菌，冷却后置冰箱保存。②菌液制备：将实验菌种先接种到斜面活化培养24 h, 脓肿分枝杆菌培养2 d后用灭菌生理盐水洗下，计数后用液体培养基配成108 cfu/ml的菌液。③抑菌圈试验：用灭菌后的涂布环将试验菌液均匀涂抹于固体琼脂平板上，每个平板放上3个药物纸片，脓肿分枝杆菌培养2 d，其它实验菌培养24 h后观察，记录抑菌环直经。
2.2 敏感菌的MIC定量实验对3种药液进行药物敏感性实验以后，挑选敏感的菌种，采用液体培养基连续稀释法培养后检测每种黄连生物碱对敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）。