红曲菌株的RAPD多态性分析

作者：丁红梅 葛尔宁 王泽时。

【摘要】 ［目的］ 研究 红曲分离株的遗传多样性和亲缘关系，为种质鉴定、保护和利用提供 参考 。［ 方法 ］用随机引物对10个红曲菌株进行RAPD 分析 ，从中筛选出63特征性好，多态性高的RAPD图谱，用NTSYSPC2.1软件进行同一性和差异性分析并根据遗传距离构建系统进化树。［结果］红曲分离株间的同一性平均73.32%，表明它们的遗传背景具有很大的相似性；RAPD聚类结果与菌株的形态差异相关，表明RAPD分子标记进行菌株鉴别与传统形态分类鉴别结果基本一致，鉴别能力较强。 ［结论］基于RAPD多态性的遗传分析能从分子水平上揭示红曲菌的遗传背景差异，为分类鉴定、种质起源和系统进化提供辅助手段和技术依据。 毕业论文。

【关键词】 红曲菌；RAPD分析；遗传同一性；系统进化树。

Abstract: ［Objective］ To study the genetic diversity and relative relationship of different Monascus trains to provide reference for classification and protection of germ plasm resources.［Methods］ Comparing the results of the random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprints derived from 10 cultivated strains of Monascus, 63 RAPD electrophoresis atlases were selected to calculate the genetic identity and divergence among them by NTSYSPC2.1 software.And then phylogenetic tree of Monascus strains was concEived according to thEIr genetic distance by clustering method.［Results］ It was suggested that the comparability of genetic backgrounds was plenty because of 73.32% average identity of Monascus strains. The results of RAPD analysis were consistent with that of morphologic study, so the RAPD molecular marker technology is an effective way to identify Monascus strains.［Conclusion］ RAPD analysis can reveal the differentia of genetic backgrounds of Monascus strains, and it could be applied widely in classification and identification, germ plasm origin and evolution. 代写论文。

Key words: Monascus; RAPD analysis; genetic identity; phylogenetic tree 　　红曲是一味在《本草纲目》、《医林纂要》等都有记载的天然佳品。长期以来，对红曲菌分类鉴定均根据其形态特征和生 理学 特性 ［14］。由于红曲菌属下分类的形态、生化指标均受培养基质、温度等环境条件 影响 ，表现出较大差异性，加上有些种界限不明确，使红曲菌的命名和分类在学术上颇多争议［5］。 　　DNA分子在物种鉴别分类和筛选上比形态学、血清学、化学指纹图谱等更准确， 目前 已有限制性酶酶切片段长度多态性(RFLP)，随机扩增多态DNA(RAPD)，串联重复序列(SSR)等［6］直接在DNA水平上进行遗传分析的实验方法。由于红曲菌的分子生物学研究起步较晚，基因组序列相关信息尚不清楚，限制了常规分子生物学方法的使用。RAPD标记技术不需要预先知道DNA序列信息，对DNA质与量要求不高，引物无种属界限［7］等优点使其成为研究红曲菌株鉴别、遗传分析的首选。 代写论文。

1 材料和方法 毕业论文。

1.1 实验材料。

毕业论文。

1.1.1 供试菌株及培养基：供试红曲菌株编号1～10依次为AS 3.554、AS 3.972、B、F、J、M2、P、S、ZW5、古田，其中F为Monascus ruber，余为Monascus anka.B、F、J、P、S由浙江中医药大学肿瘤研究室保存，AS 3.554、AS 3.972、M2、ZW5、古田购自浙江省微生物研究所，AS 3.554、AS 3.972为 中国 普通微生物菌种保藏中心保存菌株。MEA（malt extract agar）［6］培养基。 毕业论文。

1.1.2 主要试剂及随机引物：主要分子生物学试剂购自杭州博日 科技 有限公司及宝生物工程（大连）有限公司，RAPD分析所用1O碱基随机引物S251S350、S2001S2050购自上海生工生物技术公司，编号及核苷酸序列见上海生工生物技术公司网页。 代写论文。

1.2 实验方法 论文网。

1.2.1 红曲基因组DNA的提取：红曲菌体基因组DNA的提取采用CTAB法［8］进行。 论文代写。

1.2.2 RAPD反应体系：RAPD反应体系为1×PCR Bufer，dNTPs 1mmol／L，Taq酶1.2U，随机引物0.2μmol／L，模板DNA 20ng，反应总体积为20μL。 论文代写。

1.2.3 RAPD反应参数：扩增反应在梯度PCR扩增仪上进行，94℃预变性6min，进入92℃变性40s、36℃退火40s、72℃延伸2min的35个循环，最后72℃补平7min，4℃终止反应。