联合检测血浆中GSHPX、MDA及肿瘤蛋白对肺癌筛检的Bayes判别分

作者：卢桥发,王启明,甄海宁,鲍敏,张焕景。

【摘要】 目的 探讨血浆中GSH—PX、MDA、 p21、p53及HSP70蛋白实测值建立的Bayes模型对肺癌的筛检价值。方法 用DTNB法对48例肺癌、34例非肿瘤性肺病病例（简称对照组）血浆中GSHPX活力进行测定；用TAB法测定其MDA的含量；采用Western 斑点印迹法测定血浆中p21、p53及HSP70蛋白水平,并用其实测值建立的Bayes模型。结果 肺癌组血浆中GSHPX活力小于对照组， MDA高于对照组，具有显著性意义（P0.05）；与对照组相比,肺癌组p21、p53及HSP70蛋白水平均增高，差异具有显著性意义（P0.01）；Bayes模型的敏感性、特异性和准确率分别为83.33%,74.19%和93.33%。联合细胞学检测,其诊断的敏感性可提高至91.67%。结论 GSHPX、MDA、p21、p53及HSP70蛋白联合检测建立的Bayes模型对肺癌筛检提供了一条新的方法，可补充细胞学的诊断价值。

【关键词】 GSHPX；MDA；肿瘤蛋白；Bayes模型；肺癌。

Bayes Model of GSHPX,MDA and Oncogene Proteins and Its Possible Role in The Screening of Lung Cancer。

Key words：GSHPX;MDA; Oncogene protein;Bayes model; Lung cancer。

肿瘤发生的两个阶段，即诱发阶段和促癌阶段, 均和活性氧、自由基有关。肺癌的发生是随时间而累积的多分子遗传学改变过程［1］，只要任何一种癌基因蛋白阳性，表明细胞已经有癌基因突变和/或抑癌基因缺失，即成为恶性细胞。ras基因是一常见癌基因，变异的p21蛋白（ras基因突变产物）可使细胞产生持续增殖；p53基因通过参与细胞周期负调控而调节细胞增殖与分化［2］。目前，越来越重视血清学标志物在肿瘤早期诊断中的应用［3］。为此，本文通过检测48例肺癌患者血浆中的谷光甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxide,GSHPX）的活力，丙二醛（Malon dialdehyde,MDA）的含量，p21、p53及HSP70蛋白的水平，并建立Bayes判别方程，探讨其作为肺癌筛检的可能性。

1材料和方法。

1.1对象 经病理和/或细胞学证实的自然人群肺癌患者48例，其中鳞癌23例，腺癌25例。48例肺癌进行了痰细胞学检查和/或纤支镜检查后留痰,其中痰细胞学检查阳性病例8例；经纤支镜检查后留痰细胞学阳性病例13例。脱落细胞阳性检出率为43.75%。以非肿瘤性肺病组（N=34）为对照，包括支气管炎，肺炎，肺结核，矽肺，支气管扩张等；两组年龄（肺癌组64.86±9.53岁，对照组62.62±9.12岁）、工龄（肺癌组31.93±8.17年，对照组31.84±7.00年）相当，具有可比性。

1.2方法。

1.2.1样品收集检测对象清晨空腹抽取静脉血5mL，分离血浆， —70℃保存，临用前取出融化。

1.2.2GSHPX及MDA的测定GSHPX测定用DTNB法直接测定，其单位为活力单位，其定义为0.1mL血浆在37℃反应5min使反应液中谷光甘肽（GSH）降低1umol/mL为一个活力单位。MDA测定采用硫代巴比妥酸（TAB）比色法，单位为nmol/mL，所用试剂均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2.3肿瘤蛋白的测定用Western 斑点印迹法测定血浆中p21、p53及HSP70蛋白水平。一抗分别为兔抗人p21（panras）抗血浆（1∶1000，美国sigma公司产）、兔抗人p53抗血浆（1∶1000，美国sigma公司产)和兔抗人HSP70抗血浆（1∶1000，同济医学院职业医学研究所自制）。二抗为辣根素过氧化物酶（HRP）标记的兔抗人IgG(1∶300，武汉博士徳生物工程公司)。用CS—930型双波段色谱扫描仪（日本岛津）进行图像分析，用积分光密度值代表蛋白水平。

1.3统计学处理先用SAS6.12软件建立数据库，组间差异性比较用t检验，率的比较用χ2 检验，最后对分析指标进行Bayes分析。

2结果。

2.1GSHPX和MDA含量测定。

由表1可知，肺癌组GSH—PX活力显著低于对照组；MDA显著高于对照组（P0.05）。

2.2p21、p53及HSP70蛋白的表达水平表1 血浆中谷光甘肽活力和MDA的比较 表2 血浆中p21、p53及HSP70蛋白表达水平（积分光密度±s)） 由表2可知，与对照组相比，肺癌组p21、p53及HSP70蛋白表达水平均增高，差异具有显著性意义， P0.05。

2.3GSHPX、MDA、p21、p53及HSP70蛋白联合检测的Bayes判别分析将48例肺癌、34例非肿瘤性肺病病例的GSHPX、MDA、p21、p53及HSP70测定值分别建立Bayes方程，进行Bayes判别分析。结果显示，肺癌Yc=—40.8340+0.8954x1+7.368x2+0.0591x3+0.0285x4+0.0302x5 ;非肿瘤性肺病 Yl=—31.0427+0.112x1+5.055x2+0.0481x3+0.0238x4+0.0228x5。x1，x2，x3，x4,x5分别代表GSHPX、 MDA、HSP70、p21和p53的实测值。判别标准：Yc Yl,将样本判入肺癌组；Yc Yl,将样本判入非肿瘤性肺病组。该组函数回代样本，回代的敏感性、特异行和符合率分别为83.33%、74.19%和93.33%。