青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究
作者：莫峥嵘 蔡仁文 李玖慧 陈光英 韩长日。
【摘要】 目的研究青梅茎中提取岩白菜素的最佳工艺。方法以岩白菜素含量为指标，比较冷浸提取、超声提取、回流提取3种方法提取物中岩白菜素含量。并以正交实验确定回流提取的最佳工艺。结果3种提取方法中回流提取的提取物中岩白菜素含量最高，正交实验优化条件为：料液比为1：15，提取时间为1.5 h，提取次数1次。结论在此最佳参数组合下，岩白菜素的含量为0.23%。
Abstract：ObjectiveTo study the best extraction technology of bergenin from the stem of Vatica Mangachpoi Blanco growing in Hainan.MethodsThe cold—soaked extracting,ultrasonic extraction and heat reflux extraction technologies were respectively used for extraction of bergenin. According to the orthogonal design,the optimum reflux extraction was sought through experimental investigation.ResultsThe optimum parameters of extracting bergenin were as follows:extracting for 1.5 hours,one time,and 1:15 of the ratio of material and solvent.ConclusionThe yielding content of bergenin was 0.23% at the condition of optimum parameters.
Key words： Vatica mangachpoi Blanco; Bergenin; Extraction technology 青梅Vatica mangachpoi Blanco系龙脑香科(Diptercocarpaceae)青梅属(Vatica genus)植物，主要分布于海南保亭、三亚、东方、白沙、乐东、万宁和琼中等地［1］。在民间，海南青梅叶长期用作杀菌消毒、治疗肝炎及提取中药龙脑香。 通过对青梅茎的有效成分的提取、分离、纯化及结构鉴定，确定青梅中含有岩白菜素(bergenin ) ［2］。岩白菜素主要作用是止咳祛痰，但近年的药理实验发现岩白菜素还具有抗炎、护肝、抗溃疡、提高免疫等作用［3］。陈光英等［4］用高效液相色谱法测定青梅茎皮中岩白菜素的含量，其含量为0.8%。 由于青梅茎中含有大量的岩白菜素，而青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究还未见报道，因此，为了充分利用青梅药用植物，本实验拟对青梅茎岩白菜素的提取工艺进行实验和比较，以期优化、筛选出理想的提取工艺。
1 器材 大连依利特公司UV230紫外检测器，P230高压恒流泵（双泵），EC2000工作站；日本SHIMADZU十万分之一天平；甲醇为色谱纯, 水为重蒸水, 其余试剂为分析纯；岩白菜素标准品（购自芜湖尔塔医药科技有限公司）；青梅药材采自海南万宁，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属植物Vatica mangachpoi Blanco，样本保存在海南师范大学热带药用植物化学重点实验室内。
2 方法。
2.1 色谱条件［4］色谱柱：Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：A：0.5% 冰乙酸水溶液（V/V），B：甲醇。梯度洗脱，洗脱条件如下：0 min(A:80,B:20 V/V)；10 min(A:65,B:35 V/V)；25 min(A:64,B:36 V/V)；30 min(A:0,B:100 V/V)；42 min(A:20, B:80 V/V)；流速：0. 4 ml· min—1；检测波长274 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。在此色谱条件下，青梅茎中岩白菜素样品与岩白菜素对照品相比较，保留时间基本一致，在274 nm波长处其它色谱峰干扰小，青梅茎岩白菜素得到较好的分离而且含量较高，见图1和图2。
2.2 标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的岩白菜素对照品10 mg , 置于25 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为0.4 mg·ml—1 的储备液。以此为母液配制浓度为0.2 mg·ml—1溶液；再以0.2 mg·ml—1为母液，配制浓度为0.1 mg·ml—1的溶液；依次类推，配制成浓度分别为0.05 ，0.02 5，0.012 5 mg·ml—1的标液［4］。精密吸取不同浓度的对照品溶液各10μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样质量为横坐标，进行回归分析，则回归方程为Y＝3961.7X—103.4，R2=0.999 1，结果表明，在0.125～4 μg之间，峰面积与进样量之间的线性关系良好。该定量分析方法可用于青梅茎提取液中岩白菜素含量的检测分析。
2.3 不同提取方法提取物中岩白菜素的含量比较［5］称取青梅茎粗粉1.0 g 3份，分别加15倍量95％的乙醇，用冷浸提取法冷浸两次，1天/次；超声提取法提取两次，20 min/次；回流提取法提取两次，1.5 h/次。分别合并两次提取液，过滤，浓缩定容置10 ml容量瓶,备用。按“2.1”项色谱条件测定岩白菜素含量，结果表明，用回流提取法得到的提取物岩白菜素含量最高。所以以下实验选择回流提取法进行提取条件优化筛选。
2.4.1.1 不同提取溶剂对提取物岩白菜素含量的影响采用水、石灰水和浓度分别为30%，40%，50%，60%，70%，80%，95%的乙醇作为提取溶剂进行筛选实验，结果表明，用乙醇提取的岩白菜素含量比用水、石灰水提取的都要高，不同浓度的乙醇提取的岩白菜素含量也不同，60%的乙醇为溶剂提取岩白菜素的含量最高，因此选择60%乙醇为最佳提取溶剂。