胃粘膜Ki—67表达与Ｈｐ感染及癌变的关系探讨
【摘要】 目的 探讨胃上皮细胞增殖与幽门螺杆菌(Ｈｐ)感染的关系及Ｈｐ感染致癌的可能机制。方法 应用特殊染色法将各种病变分为Ｈｐ感染阳性组和阴性组,应用免疫组化对各组病变的增殖细胞核抗原Ki—67表达进行检测。结果 总体上看,Ｈｐ阳性组Ki—67表达的阳性率明显高于Ｈｐ阴性组;且Ｈｐ阳性组总体Ki—67表达的阳性率明显高于Ｈｐ阴性组总体(Ｐ0 05); Ki—67表达的阳性率随病变程度的加重而逐渐增加。结论 Ｈｐ感染可促进胃上皮细胞过度增殖,这种过度增殖可能是Ｈｐ感染致胃癌的机制之一。
【关键词】 Ki—67 幽门螺杆菌 癌变。
【Abstract】Objectives To explore the relationship among the cell proliferation 、helicobacter pylori( HP) infection and cancerization after HP infection. Methods The expression of Ki—67 in gastric epithelial cell was examined with immunohistochemical technique and divided into different grade according to percentage and staining intensity of positive cell. Results Of all pations ,the expressions of Ki—67 in the HP positive group was significantly higher than that in the HP negative group . The expression of Ki—67 was increased as the pathogenetic condition got worse. Conclusions HP infection, as a risk factor for gastric carcinoma ,is associated with proliferation of gastric epithelial cells, which might be one of the pathogenesis of gastric carcinoma after HP infection.
【Key words】Ki—67 helicobacter pylori (HP) carcinogenesis。
细胞增殖性的增加被认为是肿瘤发生的早期生物学改变之一，从慢性浅表性胃炎(ＣＳＧ)、慢性萎缩性胃炎(ＣＡＧ)、肠上皮化生(ＩＭ)、不典型增生(Ｄｙｓ)到胃癌(ＧＣａ)的演变过程是肠型胃癌发生的基本规律。幽门螺杆菌(Ｈｐ)感染为慢性胃炎的主要病因,所以Ｈｐ感染与胃癌的发生亦有密切的关系。因此,研究胃粘膜上皮细胞增殖与Ｈｐ感染的关系具有重要的理论意义。笔者通过免疫组化方法对Ｈｐ感染组和非感染组的ＣＳＧ、ＣＡＧ、ＩＭ、Ｄｙｓ及ＧＣａ的胃粘膜上皮细胞增殖细胞核抗原(Ki—67)表达进行检测,以探讨胃上皮细胞增殖与Ｈｐ感染的关系,并且进一步分析Ｈｐ感染在胃癌的发生过程中的生物学意义。
1 对象与方法。
1.1 研究对象。
标本来自1995年～2005年间本院病理科石蜡包埋组织标本。其中慢性浅表性胃炎(CSG)160例,慢性萎缩性胃炎(CAG)160例,非典型增生(DYS)80例,胃癌(GC)120例,所有病例均具备完整的临床病理资料。所有标本均行连续切片,片厚6μm,每例取3张切片,其中一张做HE染色,一张用于特染Hp,一张用于免疫组化方法检测Ki—67。
1.2 主要试剂。
Hp特染主要试剂包括1%硝酸银、2%硝酸银、0.1%甲苯胺蓝染液和醋酸盐缓冲液。免疫组化主要试剂包括Ki—67免疫组化试剂盒(福州迈新公司)、0.1M枸橼酸盐缓冲液、DAB显色剂(福州迈新公司)。
1.3 Hp检测方法及阳性结果判定分别采用常规HE染色、Warthin—Starry(W—S)银染法和甲苯胺蓝法检测Hp的感染情况。经常规HE染色、W—S染色、甲苯胺蓝染色后确认Hp感染有两项以上为阳性者为Hp阳性组,均阴性者为阴性组,单项阳性者退出该实验。HE染色Hp为淡紫色,W—S法染色Hp为棕黑色,甲苯胺蓝染色Hp为蓝色。
1.4 Ki—67检测及阳性结果的判定采用SABC免疫组化法，检测Ki—67的表达,一抗为小鼠抗Ki—67抗体,阴性对照用PBS代替一抗,用已知阳性切片作为阳性对照。镜下观察为细胞核着色,呈深浅不一的棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。根据染色反应的深度及阳性细胞的数量分别记分为0～3分,其中染色深度以多数细胞的呈色反应为准,浅黄色为1分,深黄色为2分,棕黄色为3分,不着色为0分。阳性细胞数10%为0分,10%～45%为1分,46%～70%为2分,70%为3分,并根据这两项的积分之和分为4级即:阴性(—)为0分,弱阳性(+)为1～2分,阳性(++)为3～4分,强阳性(+++)为5～6分。阳性细胞率的计算是先在低倍镜下随机选取细胞分布均匀的视野,再在高倍镜下用PAS病理彩色图像分析系统进行图像分析,每例计数500个细胞,然后测出阳性细胞的百分率:阳性细胞率=(阳性细胞数/500)×100%。
1.5 统计分析。
数据库建立和数据分析采用SPSS—11.0软件处理,以χ2检验进行统计分析。