天山北坡奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定
摘要对分布天山北坡集约化奶牛场进行了乳房炎发病情况和病原学研究。
结显示通对300头产奶牛和 6份奶样检测发现临床乳房炎头数阳性率%乳区阳性率80%主要病原菌有无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和少动鞘氨醇单胞菌有较高耐药性。
隐性乳房炎头数阳性率73%乳区阳性率9%病原菌较杂（少动鞘氨醇单胞菌、溶血葡萄球菌、阴道加特纳菌、西宫皮球菌、坐皮肤球菌、口腔链球菌缓症链球菌、产硫球链菌、玫瑰色库克菌、奈瑟菌）对常见抗生素有敏感性。
由以上结可见天山北坡集约化牛场临床型乳房炎和隐性乳房炎发病率较高且临床型乳房炎致病菌对抗生素有较高耐药性。
关键词奶牛；乳房炎；病原菌；分离鉴定图分类 85837+6 献标志码 编0030（05）0070奶牛乳房炎是奶牛种常见多发性疾病发生乳房炎奶牛产奶量下降牛奶品质降低干扰正常繁殖机能病情严重造成奶牛患病乳区废弃、失泌乳能力而被淘汰造成巨济损失。
引起奶牛乳房炎因素很多可由创口、环境微生物、传染性微生物等引起其传染性病原微生物引起乳房炎常见危害[]。
奶牛乳房炎病原体有80～30种其主要无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、霉形体、乳房链球菌、肠杆菌、化脓杆菌等。
据调无症状隐性乳房炎发病率更高约占整牛群50%其约90%由链球菌和葡萄球菌引起[]。
试验针对天山北坡地区奶牛场进行了乳房炎调和病原分离与鉴定以期出导致该地区奶牛乳房炎主要致病菌。
材与方法 材 样品 天山北坡养牛济带奶牛场300头产奶牛乳样。
培养基及试剂 绵羊鲜血琼脂培养基B培养基普通营养琼脂购杭州微生物试剂有限公司；奶牛隐性乳房炎临床诊断（）试剂购北京福茂地商贸有限公司。
3 仪器 VK全动生化鉴定仪精密恒温培养箱乳品分析仪（L 5557）体细胞计数仪（l r 00）。
方法 奶样采集及分析 分别从奶牛场挤奶厅里随机确定采样奶牛。
先用温水拭净采样乳区皮肤再用75%乙醇消毒采用无菌操作挤奶弃头3把奶用无菌瓶分别收集乳区乳样每乳区采集约30 L低温冷藏保存 送回实验室进行乳品品质分析和体细胞计数。
乳房炎检测 乳样采集先用温水擦洗奶牛乳房擦洗程观察乳房是否有不程充血、肿胀、发硬、发热尤其观察是否有疼痛感。
若有以上症状挤奶程要特别并记录牛观察乳汁有无变稀薄且有无絮状物或凝块以及脓汁和血液若有以上症状并结合乳房变化判定临床乳房炎。
如眼观无明显变化则反应盘留取奶样 L左右加入等量诊断液缓慢摇动使奶样与诊断液充分混合观察凝集现象并记录结按判定标准对每检样进行判定是否隐性乳房炎。
3 细菌分离培养和染色镜检 将判定临床乳房炎0份乳样（L至L0）和隐性乳房炎0份乳样（至0）分别取0 L匀涂布5%绵羊鲜血琼脂平板上放入37 ℃温箱培养～8。
培养观察培养基上有无菌落生长观察不培养基上所形成单菌落形态特征、溶血及生长情况等对不形态菌落进行涂片、染色、镜检。
鲜血平板上生长菌落形态特征、溶血及生长情况等致染色镜检结相暂归种菌；平板上病初次接种生长种菌菌苔和菌落数量明显较多归优势菌株。
生化鉴定 分离到不种类细菌根据革兰氏染色情况革兰氏阳性菌上G生化鉴定卡革兰氏阴性菌上G生化鉴定卡。
按照VK说明操作进行生化鉴定。
5 药敏试验 将纯化优势菌株单菌落接种到B液体培养基37 ℃摇床培养 用灭菌棉签匀涂布5%绵羊鲜血平板上再分别贴上药敏纸片37 ℃培养。
观察对常用兽药（阿奇霉素、头孢噻肟钠、氨苄西林钠、庆霉素、氧氟沙星、泰乐菌素、克林霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、链霉素、青霉素G）敏感性（药敏纸片药品含量与判定标准参考杭州天和微生物试剂有限公司）。
结与分析 调概况试验共采集300头产奶牛 6份乳样其有38乳区瞎。
其临床乳房炎阳性乳样由奶性质变化较检测乳品品质和体细胞计数。
检测奶牛生鲜乳平体细胞7806万L非脂乳固体775 g00 g（国限量标准≥8 g00 g）密06 gL 0 ℃ ℃（国限量标准≥07）蛋白质86 g00 g（国限量标准≥8 g00 g）脂肪8 g00 g（国限量标准≥3 g00 g）冰08 ℃（国限量标准05～056 ℃）杂质5 gL（国限量标准≤0 gL）矿物质073 g00 g。
奶牛乳房炎发病率通对300头产奶牛临床诊断和乳汁变化分析临床乳房炎结按乳区计算发病率80%按牛头数计算%。
3 细菌分离鉴定通对0份乳样细菌培养0份临床乳房炎乳样品培养发现有病原菌存根据菌落形态特征、溶血和染色镜检情况等挑选分离得到8株细菌（至8）；隐性乳房炎0份乳样5%绵羊鲜血平板培养有8份发现有细菌生长份发现任何细菌生长根据菌落形态特征、溶血和染色镜检情况等挑选分离得到0株细菌（B至B0）。
将分离到8株菌根据革兰氏染色情况用VK 鉴定出0种不细菌（表）主要有无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、少动鞘氨醇单胞菌、溶血葡萄球菌、阴道加特纳菌、西宫皮球菌坐皮肤球菌、口腔链球菌缓症链球菌、产硫球链菌、玫瑰色库克菌、奈瑟菌。
临床乳房炎乳样还分离到无乳链球菌和金黄色葡萄球菌其他菌只隐性乳房炎乳样分离到。
通表细菌分布情况可以看出临床乳房炎无乳链球菌占70%、金黄色葡萄球菌占80%和少动鞘氨醇单胞菌占50%主要优势病原菌。
隐性乳房炎少动鞘氨醇单胞菌占0%溶血葡萄球菌占30%西宫皮球菌坐皮肤球菌占30%口腔链球菌缓症链球菌占0%玫瑰色库克菌、产硫球链菌、阴道加特纳菌和奈瑟菌各占0%。
5 药敏试验金黄色葡萄球菌全部耐药无乳链球菌对青霉素有敏感性少动鞘氨醇单胞菌对庆霉素和氧氟沙星有敏感性溶血葡萄球菌对氧氟沙星和恩诺沙星有敏感性玫瑰色库克菌对青霉素、阿奇霉素、克林霉素、庆霉素、氧氟沙星、氟苯尼考和头孢噻肟钠等敏感阴道加特纳菌对头孢噻肟钠、克林霉素、氨苄西林钠、氧氟沙星、阿奇霉素和庆霉素等有敏感性。
3 讨论试验检测乳房炎发病率非常高隐性乳房炎头数阳性率可达73%乳区阳性率达9%比008年李建军报道新疆集约化牛场隐性乳房炎头数阳性率675%、乳区阳性率366%有所增加。
近几年规模化养殖都有合理、配套管理程序和规以及先进配和挤奶设备什么乳房炎发病率有增无减呢？笔者采样发现试验采样近0%临床乳房炎阳性牛发病乳区所产乳汁明显不正常但这样牛仍然出现挤奶厅里并且这样乳区还正常机械化挤奶。
患有乳房炎牛继续挤奶除挤奶工身问题外还有监管问题。
因要加对挤奶人员技术培训提高专业素质；严格监管提高责任心；严格按挤奶程序进行规操作；及检奶牛体情况及早发现隐性乳房炎给予治疗；患乳房炎奶牛严禁上厅挤奶防止交叉感染。
试验生鲜乳品质分析蛋白质含量87 g00 g虽然达到了我国新奶业安全标准8 g00 g 但远低发达国氨醇单胞菌；B9、B0奈瑟菌30 g00 g以上标准与欧美国有很差距。
非脂乳固体769 g00 g达到国标准8 g00 g密06 gL也达到国标准07 gL。
通比较发现我国生鲜乳品质与欧美国还有很差距因提高奶牛饲喂营养水平加强乳品质投入品质量；改善饲养管理和环境卫生条件严格控制和预防乳房炎也要社会各界对奶牛产业发展提供支持和助。
我国生鲜乳检测标准还将体细胞数列入检测指标。
但国际奶牛合会规定体细胞数0万～0万L隐型乳房炎50万L以上临床型乳房炎[3]。
目前我国也只有三元、光明、伊利等少数几型乳业公司收购原奶候要控制体细胞数 般要是≤60万L[3]。
试产硫球链菌；奈瑟菌；阴道加特纳菌。
验检测平生鲜乳体细胞7806万L这也进步反映了奶牛乳房炎严重性。
如按照体细胞数60万L乳房炎计算头数乳房炎阳性率可达6056%乳区乳房炎阳性率达58%。
国外乳业发达国体细胞数是必检指标并且都有强制规定比如欧盟、澳利亚、新西兰要不超0万L美国要不超75万L。
生鲜牛奶平体细胞数限量低国是瑞士约0万L[]。
因我国牛奶体细胞数控制历程还很严峻。
试验对0份有明显症状临床乳房炎乳样进行细菌分离0份乳样检出细菌细菌检出率00%。
根据菌落形态分离到8株菌鉴定无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和少动鞘氨醇单胞菌3种菌。
对0份检测阳性隐性乳房炎乳样进行细菌分离8份乳样检出细菌细菌检出率80%。
而份分离到细菌可能是因该隐性乳房炎病原可能是支原体、衣原体或病毒等较难培养微生物引起。
根据菌落形态分离到0株菌鉴定8种菌。
临床乳房炎乳房炎发病期病原菌较单常见优势病原菌而隐性乳房炎分离到细菌较复杂没有特定优势菌。
试验从隐性乳房炎分离到少动鞘氨醇单胞菌[56]、溶血葡萄球菌[78]、玫瑰色库克菌[90]、奈瑟菌[]、阴道加特纳菌[]有致病性报道。
虽然由细菌生化鉴定仪VK 对口腔链球菌和缓症链球菌、西宫皮球菌和坐皮肤球菌两两不能区分菌种但西宫皮球菌[3]、口腔链球菌和缓症链球菌[]也有相关致病性报道。
坐皮肤球菌和产硫球链菌相关献较少是否有致病性还有待进步验证。
药敏试验结显示临床乳房炎病原菌由长期使用抗生素治疗产生很强耐药性而隐性乳房炎分离菌对多数抗生素有敏感性早期治疗程有很借鉴作用。
献报道隐性乳房炎病原菌主要有金黄色葡萄球菌、链球菌和肠杆菌等[57]。
可能是试验确定隐性乳房炎更接近发病初期因所分离到细菌医院报道病原菌发展到临床型乳房炎被致病性更强如金黄色葡萄球菌、链球菌和肠杆菌等所取代。
试验临床乳房炎分离到金黄色葡萄球菌和无乳链球菌但分离到肠杆菌也可能是由试验样品量较少所致。
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