乌司他丁（天普洛安）对大鼠放射性肺损伤过程中TGFβ1的影响

【摘要】 目的： 探讨乌司他丁（天普洛安）对大鼠放射性肺损伤过程中TGFβ1水平的影响，探讨其在治疗放射性肺损伤中的作用. 方法： 60只雌性SD大鼠随机分为3组： 对照组（C组）、单纯照射组（R组）、乌司他丁治疗组（U组）. R及U组大鼠行直线加速器全胸部照射一次，剂量为20 Gy. 照射后U组通过尾静脉注射乌司他丁［10 000 U/（kg·d）］，共计7 d；C，R组注射同等体积的生理盐水. 于照射后7，15，30，60 d处死动物，取部分组织行HE染色及Masson染色观察组织学及肺胶原蛋白等，另取部分组织行免疫组化染色观察TGFβ1阳性细胞；使用酶联免疫吸附分析法检测肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平. 结果： R，U组在照射后肺间质密度、TGFβ1阳性面积以及肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平随时间增加而逐渐升高，其中以R组30，60 d时与C组比较最为明显(P0.01)，同时可以发现U组与同期R组相比较具有统计学意义(P0.01)；肺泡灌洗液和血清中TGFβ1水平变化与肺组织病理学变化趋势基本一致. 结论： TGFβ1在放射性肺损伤发病机制中起到重要作用，间接地反应了放射性肺损伤程度，乌司他丁能通过显著降低TGFβ1的水平，从而抑制炎症反应的发生与发展，有效地防护放射性肺损伤.

【关键词】 乌司他丁 转化生长因子β1 肺 辐射损伤。

0引言。

放射性肺损伤是临床胸部肿瘤放疗、骨髓移植预处理、平时核辐射事故及战时核辐射后严重并发症. 研究发现转化生长因子β1（TGFβ1）在放射性肺损伤中起到重要作用［1］. 乌司他丁（天普洛安）是一种广谱的蛋白酶抑制剂，能够抑制多种细胞因子及炎症介质，在临床上已经广泛应用于多个领域，我们通过动物实验建立放射性大鼠肺损伤模型，发现乌司他丁能有效降低TGFβ1水平，为治疗放射性肺损伤提供了一种新的方法.

1材料和方法。

1.1材料健康雌性SD大鼠60只，体质量(180±20) g，购于第四军医大学实验动物中心；采用德国西门子公司的6MVX直线加速器；图像采集使用OLYMPUSBX51型号显微镜系统；图像分析使用美国Media Cybernetics公司的ImagePro Plus 6.0图像分析软件；酶标仪使用美国BioRad公司生产的BioRad450型；TGFβ1大鼠酶联免疫吸附测定试剂盒及兔抗大鼠TGFβ1 mAb试剂盒购于美国Santa Cruz公司；ABC免疫组化试剂盒购于美国Sigma公司；乌司他丁（天普洛安）购于广东天普生化医药股份有限公司.

1.2方法。

1.2.1动物模型制备与实验分组60只雌性SD大鼠随机分为3组（每组20只）：正常对照组（C组）、单纯照射组（R组）、乌司他丁治疗组（U组）. 后两组动物经戊巴比妥40 mg/kg腹腔麻醉后，以自制的装置固定大鼠，胸部覆以23 mm厚蜡块以调整剂量分布，铅屏蔽头部与腹部行直线加速器全胸部照射，单次剂量为20 Gy（2 Gy/min），距离1 m，面积4.5 cm×4.5 cm. U组于照射当日开始以乌司他丁10 000 U/kg尾静脉注射，而后每天相同剂量静注，共计7 d；C，R组同期尾静脉静注同等体积的生理盐水.

1.2.2标本采集于照射后7，15，30，60 d每组取5只麻醉后，直接从心脏采血2 mL，立刻置入含EDTA的抗凝管中混匀，静置30 min后以1500 r/min离心15 min，留取血浆冻存于—70℃；将大鼠右侧肺门结扎,气管插管,注入生理盐水4 mL,保留3 min后吸出,反复3次,收集支气管肺泡灌洗液BALF,将BALF 4℃离心(3000 r/min, 4 min),吸取上清液冻存于—70℃待测；取右下肺以40 g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片.

1.2.3肺组织病理学观察各组大鼠肺组织石蜡切片分别行苏木素伊红（HE）染色观察动物肺组织一般病理学改变，每例实验动物选5张切片，运用OLYMPUSBX51显微图像采集系统100倍下每张切片随机选取10个高倍镜视野观察. ImageProPlus 6.0（美国Media Cybernetics公司）医学图像分析软件进行计算机图像分析，测定肺间质面密度等；同法用Masson染色观察肺组织胶原蛋白沉积情况.

1.2.4免疫组化检测TGFβ1的表达取包埋好切片，按试剂盒说明书步骤进行，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体稀释度为（1∶100），DAB显色，苏木素轻度复染核，光镜下观察. 结果以胞质内可见棕红色颗粒者为阳性，以肺泡实质TGFβ1阳性表达面积作为检测TGFβ1表达的半定量指标.

1.2.5酶联免疫吸附（ELISA）方法测定TGFβ1的含量取冻存的血浆及肺泡灌洗液，按照试剂盒说明书步骤严格操作.

统计学处理：采用SPSS12.0统计软件进行数据分析，正态分布数据以x±s表示，行单因素方差分析及SNKq检验，P0.05为差异有统计学意义.

2结果。

2.1肺组织病理学变化HE染色显示C组肺组织结构正常；R组7 d肺泡壁增厚，肺毛细血管扩张、充血，少量炎细胞浸润，15 d出现局限性炎症浸润灶，30，60 d肺水肿明显，局限性肺实变；U组各期炎症、水肿均较R组减轻（图1）. R组在照射后30，60 d肺间质面密度逐渐增大(P0.01)，而U组与同期R组比较明显减小(P0.01，表1）. Masson染色显示C组可见淡蓝色的基质胶原较少，主要分布在气道及血管外膜. R组7，15 d基质胶原与C组相比较稍有增加，30 d以后血管外膜及肺泡间隔胶原纤维增多，U组与R组同期相比胶原纤维减少（图2）.表1不同组间放射性肺损伤肺间质面密度的变化。