血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾小管发育中的表达

作者：冯勇, 陆建成, 于嵩, 李晓明。

【摘要】 目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体1(Angiotensin Ⅱ receptor type 1，AT1R) 和受体2（(Angiotensin Ⅱ receptor type 2，AT2R)在小鼠肾小管发育中的表达及其与肾脏发育的关系。方法 采用免疫组织化学方法和体视学方法检测胚龄14、15、16、18天胎鼠及生后1、3天仔鼠肾小管AT1R和AT2R的表达。结果 AT1R于胚龄15天开始出现在肾小管，胚龄16天达到高峰，随后表达逐渐减弱，生后3天微量表达；AT2R于胚龄16天开始出现在肾小管，胚龄18天达到高峰，以后表达逐渐减弱，至生后3天基本消失。结论 小鼠肾脏发育早期AT1R和AT2R与肾小管的增殖和分化密切相关。

【关键词】 血管紧张素Ⅱ受体1； 血管紧张素Ⅱ受体2； 小鼠； 肾小管； 体视学。

Abstract: Objective To observe the expression of angiotensinⅡAT1 receptor and angiotensinⅡ AT2 receptor in tubules and investigate the relationships between them and kidney development in mouse. MethodsThe expression of AT1 receptor and AT2 receptor was examined and analyzed in the kidney of mouse embryos at 14 d, 15 d, 16 d, 18 d, 16 d by immunohistochemistry. Results At E15, AT1 receptor emerged. At E16, the expression of AT1 receptor was highest and then decreased gradually. At E16, AT2 receptor emerged. At E18, the expression of AT2 receptor was most abundant and then decreased gradually. Conclusions It is supposed that the expression of AT1 receptor and AT2 receptor appears to correlate with the differentiation and proliferation of of renal tubules during development of mouse kidney.

Key words: angiotensinⅡ receptor 1; angiotensinⅡ receptor 2; mouse; tubule; stereology。

近年来研究证实，血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）是肾素血管紧张素系统中最重要的活性肽，在肾脏的发生发育中起着非常重要的作用［1］。AngⅡ主要通过与它的受体结合发挥生物学功能，现在已经明确的受体主要有血管紧张素Ⅱ受体1 (angiotensin Ⅱ receptor type1，AT1R)和受体2(angiotensin Ⅱ receptor type2，AT2R)［2］。已有研究证实AngⅡ对肾小管有促增长、调亡的作用。但AngⅡ是与何种受体结合所发挥的这些作用还未明确。本实验应用免疫组织化学技术并结合体视学方法观察AT1R和AT2R在小鼠早期肾小管发育中的表达，探讨AT1R和AT2R在早期肾小管发育中的作用机制。

1 材料和方法[*2]。

1.1 材料 25～30 g的成年健康雌、雄性昆明系小白鼠24只，由锦州医学院实验动物中心提供；抗AT1R、AT2R多克隆抗体、SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 标本制备。

昆明系小白鼠雌、雄（3∶1）同窝饲养。见雌鼠阴道栓出现计为胚龄（embryonic days，E）0 d。选取胚龄14 d、15 d、16 d、18 d的胎鼠及生后日龄1 d、3 d的仔鼠处死后剖腹取出肾脏，10%福尔马林溶液固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，切片5 μm。

1.3 AT1R和AT2R免疫组织化学染色 (SABC法) 将切片贴附于多聚赖氨酸处理过的载玻片上，进行免疫组织化学染色。染色步骤如下： 二甲苯脱蜡，3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，枸橼酸盐煮沸，正常山羊血清封闭，一抗（工作浓度1∶150）湿盒中4℃过夜，二抗37℃孵育30 min，SABC37℃孵育30 min，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 体视学测量。

每个动物的肾脏系统随机选取5张切片，每张切片在油镜下按“S”形等间隔选取视野，采用方格测试系统，交点计数法测算AT1R和AT2R在肾小管细胞阳性表达的体积密度（Volume density），参照系为肾皮质，计算公式为Vv = Pi/Pc, 其中Pi为测试系统落在阳性细胞上的点数，Pc为落在肾皮质上的点数。

1.5 统计学处理。

应用SPSS软件进行方差分析， P0.05认为有显著性差异。

2 结果[*2]。

2.1 免疫组织化学染色结果 AT1R和AT2R在小鼠肾小管中有不同程度的表达。细胞膜和细胞浆呈现不同程度的棕黄色为阳性结果(照片1～2)。